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規(guī)格 | 50次 | 貨號 | YS-P013734 |
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品牌 | YSRIBIO |
服務(wù)流程:
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
流感病毒H13亞型檢測試劑盒(熒光PCR法) | 50T | YS-P013734 |
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學(xué)中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。
猴熱休克蛋白20(HSPβ6/HSP-20) 鹽酸非那吡啶;3-偶氮-2,6-二氨吡啶鹽酸鹽神經(jīng)元素2抗體
猴叢生蛋白(CLU)鹽酸非那吡啶(標準品)抑癌因NDRG3抗體
猴發(fā)動蛋白1(DNM1) 鹽酸阿扎司瓊(標準品)有絲分裂氧化酶1抗體
猴磷脂酰肌特異性磷脂酶Cγ2(PLCγ2)鹽酸普萘洛爾(標準品)NADPH oxidase 3抗體
猴Fas凋亡抑制分子3(FAIM3)美他多辛(標準品)NADPH氧化酶NOX家族的成員4抗體
猴早期生長應(yīng)答蛋白3(EGR3)D-焦谷氨酸(標準品)分裂周期相關(guān)蛋白1抗體
猴白介素16(IL-16)3-吲哚酸(標準品)NFAM1抗體
猴免疫球蛋白G3(IgG3)異鼠李素-3-O-槐二糖-7-O-鼠李糖苷(標準品)環(huán)指蛋白67抗體
猴核孔蛋白35kda(NUP35)(-)-Holostyligone神經(jīng)母瘤抑瘤蛋白1抗體
猴磷酯酰肌特異性磷脂酶Cβ1(PLCβ1/PI-PLC) 5-羧-X-羅丹明嗜中性粒胞漿因子1抗體
猴巨噬清道夫受體1 (MSR1)硫氧嘧啶(標準品)線粒體復(fù)合物NDUFS3蛋白抗體
猴性別決定區(qū)Y框蛋白1(SOX1)鹽酸塞利洛爾(標準品)雄激素受體復(fù)合物相關(guān)蛋白/核受體相互作用蛋白抗體
猴接頭蛋白2(ELMO2)十二烷硫酸鈉(標準品)9號染色體開放閱讀框156抗體
猴免疫球蛋白E Fc段受體I(FcεR I) 鹽酸米安色林(標準品)核因子活化T胞漿蛋白3抗體
猴低分子量角蛋白(CK-LMW)達卡他韋;BMS790052干轉(zhuǎn)錄因子NANOGP8抗體
猴肝臟糖原磷酸化酶(PYGL)鹽酸頭孢肟神經(jīng)凋亡抑制蛋白抗體
流感病毒H13亞型檢測試劑盒(熒光PCR法)Endo G /FITC 熒光素標記核酸內(nèi)切酶G抗體IgG草達津 分析標準品
Phospho-ELk1 (Ser383) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化轉(zhuǎn)錄因子ELK1抗體IgG四錫 分析標準品
Emp1/FITC 熒光素標記表皮膜蛋白1抗體IgG磺隆 分析標準品,95%
Endostatin/FITC 熒光素標記內(nèi)皮抑素/內(nèi)皮他丁抗體IgG吡螨 分析標準品
envelope glycoprotein Yellow fever virus/FITC 熒光素標記抗黃熱病包膜糖蛋白抗體IgG滅菌唑 分析標準品,99.2%
Beta-endorphin/FITC 熒光素標記人、大、小鼠、羊、牛beta內(nèi)啡肽抗體IgG噻蟲啉 分析標準品
ENPP1/PC-1/FITC 熒光素標記抗核苷酸內(nèi)焦磷酸酶/磷酸二酯酶1抗體IgG唑蟲酰 分析標準品,99%
EGFL7/FITC 熒光素標記抗脈管發(fā)育(組裝)蛋白抗體IgG氯烯標準溶液1000ng/ul,溶劑:
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