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規(guī)格 | 50次 | 貨號 | YS-P013455 |
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品牌 | YSRIBIO |
服務(wù)流程:
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
禽白血病病毒通用RT-PCR試劑盒 | 50次 | YS-P013455 |
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
大鼠免疫球蛋白M(IgM)2-己酮(standard for GC,>99.5%(GC))雙精氨酸水解酶2抗體
大鼠誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶(NOS2/iNOS)正庚(standard for GC,≥98%(GC))D酪氨酸激酶衰減蛋白1抗體
大鼠抑制素A(INHA)七氟丁酸(98%)雙特異性酪氨酸磷酸化調(diào)節(jié)激酶3抗體
大鼠抗利尿激素(ADH)2,5-己二酮(standard for GC,≥99%(GC))肌營養(yǎng)蛋白α抗體
大鼠抑制素βC(INHbC)βC(INHbC)2,5-己二酮(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC))多巴β羥化酶抗體
大鼠抑制素結(jié)合蛋白(INHBP)己烷(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.8% (GC))抑癌因抗體
大鼠核因子κB抑制蛋白α(IKBα)六氟異(HFIP)(用于GC衍生化, ≥99.8% (GC))DNA轉(zhuǎn)移酶1抗體
大鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白5(IGFBP5)酸(標(biāo)準(zhǔn)品)DNA轉(zhuǎn)移酶-3α抗體
大鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白6(IGFBP6)糠(standard for GC, ≥99.5% (GC))DNA轉(zhuǎn)移酶-3β抗體
大鼠胰島素受體β(ISR-β)鄰二酸二正戊酯(CP,97%)死亡受體3抗體
大鼠白介素35(IL-35)3',3'',5',5''-四溴酚酞酯(80%,用于顯微鏡)死亡受體4抗體
大鼠胰島素樣生長因子2(IGF-2)三氯(無水級,≥99%,含100-200ppm戊烯穩(wěn)定劑)精神分裂癥易感因抗體
大鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白1(IGFBP-1)異(無水級, 99.5%)蓬亂蛋白1抗體
大鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白2(IGFBP-2)四(無水級,≥99.9%, 無穩(wěn)定劑)肌Dystrobrevin β蛋白抗體
大鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)四(ACS,>99.5%(GC))異常凝血酶原/脫-γ-羧凝血酶原抗體
大鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白4(IGFBP-4)正庚烷(AR,98%)結(jié)蛋白抗體
禽白血病病毒通用RT-PCR試劑盒MDM2 雙微體2癌因抗體L-纈氨酸酯鹽酸鹽 99%
Phospho-MDM2 (Ser166) 磷酸化雙微體2癌因抗體環(huán)烷羧酸 98%
MDR1/p-GP/CD243 多藥耐藥蛋白/P-糖蛋白抗體吡咯烷 99%
MEF2A 肌增強(qiáng)因子2抗體1-四氫萘酮 97%
Phospho-MEF2A (Thr312) 磷酸化肌增強(qiáng)因子2抗體鎢酸銨 99.99% (metals basis)
Phospho-MEF2A (Ser408) 磷酸化肌增強(qiáng)因子2抗體鎢酸銨 AR,99%
Megsin 絲氨酸蛋白酶抑制劑B7抗體仲鎢酸銨 99.95 %
Melamine 三聚抗體鉬酸銨,四水 AR
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