當(dāng)前位置:上海研生實業(yè)有限公司>>PCR類>>熒光定量PCR試劑盒>> 50次新加坡石斑魚虹彩病毒PCR試劑盒
規(guī)格 | 50次 | 貨號 | YS-P013564 |
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品牌 | YSRIBIO |
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
服務(wù)流程:
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
新加坡石斑魚虹彩病毒PCR試劑盒 | 50次 | YS-P013564 |
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學(xué)中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
豬二氫硫辛酸脫氫酶(DLD)DL-谷氨酰生長因子受體結(jié)合蛋白2相關(guān)接頭蛋白2抗體
豬紐蛋白(VCL)DL-脯氨酸G蛋白α亞單位蛋白Q抗體
豬趨化因子樣因子(CKLF)DL-氨酸酯鹽酸鹽生長抑制DNA損傷因GADD45β抗體
豬低分子量角蛋白(CK-LMW)L-谷氨酸5酯生長抑制蛋白22抗體(化控制J蛋白)
豬膜聯(lián)蛋白A2(ANXA2 ) N-酰-DL-亮氨酸G蛋白偶聯(lián)受體39抗體
豬堿性磷酸酶(ALP) N-碳芐氧賴氨酸,N6-Cbz-L-賴氨酸橋尾蛋白抗體
豬不均一核糖核蛋白U (HNRPU)鹽酸艾司洛爾(標(biāo)準(zhǔn)品)半乳糖凝集素8抗體
豬腦素受體(CNR1)鹽酸艾司洛爾糖磷脂酰肌錨定蛋白137抗體
豬胰淀粉酶α2(AMY2) H-Met-OtBu.HCL胰高血糖素樣肽2受體抗體
豬抗胰島素受體抗體(AIRA) 麥芽糖生長休止特定蛋白1抗體
豬白三烯A4水解酶(LTA4H) L-酰γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶輕鏈1抗體
豬G蛋白β1(GNβ1)L-蘇氨酸酯鹽酸鹽γ1氨丁酸受體α5/GABRα5抗體
豬原鈣黏素β16(PCDHβ16) N-酰-L-色氨酸酯G蛋白激活內(nèi)向通道1抗體
豬角膜鎖鏈蛋白(CDSN)N-酰-DL-色氨酸G蛋白激活內(nèi)向通道3抗體
豬周期素B(CCNB) N-酰-DL-色氨酸G蛋白偶聯(lián)受體48抗體
豬蛋白激酶抑制劑β(PKIβ)L-酪氨酸叔丁酯糖轉(zhuǎn)移酶GLT8D2抗體
新加坡石斑魚虹彩病毒PCR試劑盒SUR1 磺酰脲類藥物受體1抗體四氫氧化銨 AR,25%水溶液
SUMO 1 類泛素蛋白抗體四氫氧化銨 AR,25%溶液
SV2A 突觸泡蛋白2A抗體四氫氧化銨溶液 10%水溶液
Synphilin-1 synphilin-1抗體四氫氧化銨溶液 10%溶液
phospho-Syndecan 4(Ser179) 磷酸化多配體聚糖4(Ser179)抗體四溴化銨 98%
SYK 非受體型酪氨酸蛋白激酶抗體四溴化銨 for ion pair chromatography
Phospho-Syk (Tyr323) 磷酸化非受體型酪氨酸蛋白激酶抗體四氫氧化銨 五水合物 97%
Phospho-Syk (Tyr525/526) 磷酸化非受體型酪氨酸蛋白激酶抗體四溴化銨 99%
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