當前位置:上海研生實業(yè)有限公司>>PCR類>>熒光定量PCR試劑盒>> 50次嗜水氣單胞菌檢測試劑盒(熒光PCR法)
規(guī)格 | 50次 | 貨號 | YS-P013914 |
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品牌 | YSRIBIO |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
服務(wù)流程:
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
嗜水氣單胞菌檢測試劑盒(熒光PCR法) | 50T | YS-P013914 |
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
豚鼠核孔蛋白160kda(NUP160)美羅培南鈉鹽鋅指蛋白772抗體
豚鼠蛋白C(PROC)6,8-二氧莫西沙星鹽酸鹽鋅指蛋白740抗體
豚鼠多肽YY (PYY)8-氧莫西沙星鋅指蛋白843抗體
豚鼠雌激素受體α(ERα) 8-去氧-8-氟莫西沙星鋅指蛋白619抗體
豚鼠促血管生成素1(ANG1)外消旋順式-莫西沙星酰-β-D-葡萄糖苷酸鋅指蛋白131抗體
豚鼠IgA Fc片段受體(FcaR)莫西沙星鹽酸鹽一水合物鋅指蛋白131抗體
豚鼠果糖二磷酸縮酶A(ALDOA) 8-氟-6-氧莫西沙星鋅指蛋白449抗體
豚鼠谷胱甘肽還原酶(GR)(R)-酰萘普生-β-D-葡萄糖苷酸芐酯鋅指蛋白346抗體
豚鼠八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子4(OBTF4)(S)-酰萘普生-β-D-葡萄糖苷酸芐酯鋅指蛋白532抗體
豚鼠免疫球蛋白E Fc段受體II(FcεR II) (R)-O-去萘普生鋅指蛋白516抗體
豚鼠死亡相關(guān)蛋白6(DAP6)(S)-酰萘普生-β-D-葡萄糖苷酸鋅指蛋白750抗體
豚鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體2(TFR2)(S)-萘普生異酰-β-D-葡萄糖苷酸鋅指蛋白744抗體
豚鼠生長激素2(GH2)(R)-酰萘普生-β-D-葡萄糖苷酸鋅轉(zhuǎn)運體8蛋白抗體
豚鼠著絲粒蛋白A(CENPA) (1RS)-1-(6-氧-2-萘)(萘普生雜質(zhì)K)鋅指蛋白852抗體
豚鼠表睪酮(ET)6'-氧-2'-萘酮 (萘普生雜質(zhì) L)鋅指蛋白503抗體
豚鼠蛋白酶激活受體1(PAR1)潑尼松21-鋅指蛋白672抗體
嗜水氣單胞菌檢測試劑盒(熒光PCR法)Phospho-PRK1 (Thr774)/PRK2 (Thr816) /FITC 熒光素標記磷酸化內(nèi)分泌腺衍生血管內(nèi)皮生長因子抗體IgG血管緊張素I 97%
HSP-90 Alpha/HRP 辣根過氧化物酶標記熱休克蛋白90α抗體IgGD-氨酰-D-氨酸 99%
HSP-90 Beta /HRP 辣根過氧化物酶標記熱休克蛋白90β抗體IgGH-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-絲氨酸-OH ≥95% (HPLC)
CD4/HRP 辣根過氧化物酶標記CD4抗體IgG精氨酰-甘氨酰-天冬氨酸 97%
Insulin/HRP 辣根過氧化物酶標記胰島素抗體IgGArg-Phe-Asp-Ser 98%
PLAU/uPA/FITC 熒光素標記尿激酶型纖溶酶原激活因子抗體IgGD-精氨酸鹽酸鹽 98%
Plectin/FITC 熒光素標記網(wǎng)蛋白抗體IgGN-酰甘氨酸 99%
PLAUR/uPAR/FITC 熒光素標記尿激酶型纖溶酶原激活因子受體抗體IgGγ-氨丁酸 99%
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