當前位置:上海研生實業(yè)有限公司>>PCR類>>熒光定量PCR試劑盒>> 50T貓支原體(MF)檢測試劑盒(熒光-PCR法)
規(guī)格 | 50T | 貨號 | YS-P014325 |
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品牌 | YSRIBIO |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
服務(wù)流程:
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
貓支原體(MF)檢測試劑盒(熒光-PCR法) | 50T | YS-P014325 |
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
魯斯考皂苷元(標準品)英文名稱: ADP.Li3髓性白血病蛋白1抗體包裝1g
鹿角(標準品)英文名稱: Erythritol磷酸化絲裂原活化蛋白激酶1抗體包裝25g
鹿茸(馬鹿)(標準品)英文名稱: ADP.Ba組織相容性復(fù)合體2抗體包裝5g
鹿茸(梅花鹿(標準品)英文名稱: ADP.K磷酸化雷帕霉素靶蛋白抗體包裝25g
鹿銜草(標準品)英文名稱: IDP.Na2基化CpG結(jié)合蛋白2抗體包裝5g
路邊青(標準品)英文名稱: ADP.Na磷酸化雷帕霉素靶蛋白抗體包裝1g
路路通內(nèi)酯(標準品)英文名稱: D-(+)-CellobioseNADH復(fù)合體6抗體包裝25g
路路通酸(標準品)英文名稱: Cytidine-5'-diphosphate disodium salt黑色素瘤相關(guān)抗原11抗體包裝5g
綠包藤(標準品)英文名稱: Cytidine-5'-monophosphate Disodium Salt同源盒基因Msx2抗體包裝100ml
綠茶(茶葉)(標準品)英文名稱: TFA-aa-U磷酸化絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶MARK4抗體包裝25ml
綠萍(標準品)英文名稱: TFA-aa-dU膜型基質(zhì)金屬蛋白酶胞質(zhì)尾結(jié)合蛋白1抗體包裝1g
綠絨蒿(標準品)英文名稱: 5-Iodo-Uridine周期調(diào)節(jié)蛋白P95抗體包裝25g
綠原酸(標準品)英文名稱: 5-Iodo-deoxyuridine自噬微管相關(guān)蛋白輕鏈β3抗體包裝5g
化兩面針堿(標準品)英文名稱: 5-Iodo-deoxycytidine有絲分裂周期蛋白MPP9抗體包裝1g
化木蘭花堿(標準品)英文名稱: 2’-OMe Uridine減數(shù)分裂特異核結(jié)構(gòu)蛋白1抗體包裝25g
貓支原體(MF)檢測試劑盒(熒光-PCR法)AMA IgA(Human myelin antibody IgA) ELISA Kit 人抗髓磷脂抗體IgA膽鹽硫乳瓊脂培養(yǎng)(藥典) BR
MCV(Human myelin antibody IgA) ELISA Kit 人抗突變型瓜氨酸波形蛋白抗體葡萄糖肉湯 BR
AMA IgA(Human myelin antibody IgA) ELISA Kit 人抗髓磷脂抗體IgA氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)礎(chǔ) BR
Human parotid duct antibody ELISA Kit 人抗腮腺管抗體曙紅亞藍瓊脂培養(yǎng) BR
Human cartilage-antibody ELISA Kit 人抗軟骨抗體品紅亞硫酸鈉培養(yǎng) BR
AhCGAb(Human chorionic gonadotropin-antibody) ELISA Kit 人抗人絨毛膜促性腺激素抗體腸道菌增菌肉湯 BR
AhCGAb(Human chorionic gonadotropin-antibody) ELISA Kit 人抗染色體抗體糖發(fā)酵培養(yǎng)礎(chǔ) BR
ABAb(Human brain tissue antibody) ELISA Kit 人抗腦組織抗體真菌瓊脂培養(yǎng) BR
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