當(dāng)前位置:上海研生實業(yè)有限公司>>PCR類>>熒光定量PCR試劑盒>> 50次柑橘潰瘍病菌PCR試劑盒
規(guī)格 | 50次 | 貨號 | YS-P013355 |
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品牌 | YSRIBIO |
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
服務(wù)流程:
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
柑橘潰瘍病菌PCR試劑盒 | 50次 | YS-P013355 |
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。
小鼠肌鈣蛋白T(Tn-T) 鹽酸肼(>98%,BR)6號染色體開放閱讀框50抗體
小鼠肌鈣蛋白I (Tn-I)水合硫酸鐵(> 99%,BR)1號染色體開放閱讀框151抗體
小鼠相關(guān)漿蛋白A(PAPPA)沒食子酸甲酯(>98%,BC)腫瘤壞死因子受體超家族成員9抗體
小鼠堿性磷酸酶(ALP) 肌激酶(比活性:>200 U/mg,BC)復(fù)合前列腺特異性抗原單克隆抗體
小鼠神經(jīng)特異性烯化酶(NSE)磷酸酮酸-環(huán)己鹽(>98%,BC)組織蛋白酶z抗體
小鼠胰高血糖素樣肽1(GLP-1) 磷酸二酯酶 II2號染色體開放閱讀框84抗體
小鼠血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)丁二酰亞(>98%,BR)磷酸化鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2α抗體
小鼠血管生成素樣蛋白2(ANGPTL2)4-聯(lián)苯單乙酸組織蛋白酶A抗體
小鼠血管生成素樣蛋白4(ANGPTL-4)5-溴尿苷(>99%,BR)CD34抗體
小鼠血管生成素受體Tie1(ANG-R-Tie1)ADA緩沖液二鈉鹽(>99%,BR)周期素D3抗體
小鼠血管生成素受體Tie2(ANG-R-Tie2)無蛋白酶牛血清白蛋白緊密連接蛋白1抗體(C端)
小鼠血管緊張素原(AGT)六水氯化鋁轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子C/EBP α 抗體
小鼠促血管生成素1(ANG1)硬脂酸鋁核黃素轉(zhuǎn)運蛋白2抗體
小鼠促血管生成素2(ANG2)氟化銨(>95%,BR)磷酸化鈣介質(zhì)素抗體
小鼠膜聯(lián)蛋白A5(ANXA5)對甲氧基苯甲(>98%,BR)7號染色體開放閱讀框26抗體
小鼠膜聯(lián)蛋白A2(ANXA2)鉍試劑III(>99%,BR)衰變加速因子CD55抗體
柑橘潰瘍病菌PCR試劑盒FN/Fibronectin 1 纖維連接蛋白抗體4-二乙氨基苯甲 98%
FOS B FosB蛋白抗體鄰 99%
FPR1 甲酸基肽受體1抗體對 CP,98%
FRA1/FOSL1 FRA-1蛋白抗體硒粉 99.9% metals basis,200目
Phospho-FRA1 (Ser265) 磷酸化FRA-1蛋白抗體二異丁基氫化鋁 1.0 M in hexanes
FRA2/FOSL2 FRA2/FOSL2抗體基鋁 2.0 M 甲苯溶液
fowl typhoid and pullorum disease 雞白痢、雞傷寒抗體二苯 97%
FOXF1 叉頭蛋白F1抗體2-氯乙鹽酸鹽 98%
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