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規(guī)格 | 50次 | 貨號 | YS-P013559 |
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品牌 | YSRIBIO |
服務流程:
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結果交付——售后服務。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
羊邊界病病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 | 50次 | YS-P013559 |
PCR反應鑒定——PCR反應條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術概論。
豬唾液淀粉酶α1(AMY1) L-高精氨酸鹽酸鹽氨酮合成酶抗體
豬補體成分4a(C4a)3-氨酸酯鹽酸鹽高爾體卷曲螺旋蛋白1抗體
豬β2糖蛋白1抗體IgG(β2-GP1 Ab IgG)TPCK(進分)高爾體卷曲螺旋蛋白2抗體
豬骨形態(tài)形成蛋白拮抗蛋白1(GREM1)TPCK戊二酰輔酶A脫氫酶抗體
豬接頭蛋白2(ELMO2)D-纈氨酰-L-亮氨酰-L-賴氨酸-對-GTP環(huán)反饋調(diào)節(jié)蛋白抗體
豬黑色素瘤相關抗原(MAGE)谷二肽,L--谷二肽,力肽絨毛膜特異性轉錄因子GCM2抗體
豬甘露糖受體(MR) L-精氨酸酯二鹽酸廣泛控制氨酸合成1樣蛋白1抗體
豬過氧化還原酶2(PRDX2)D-氨酰鹽酸鹽β1-6 N-酰氨葡萄糖轉移酶2抗體
豬絲氨酸/蘇氨酸激酶39(STK39) 硝酸芬替康唑; 硝酸芬康唑磷酸化G蛋白激活內(nèi)向通道1抗體
豬磷酸烯式酮酸羧激酶1(PCK1)1-芐D-谷氨酸G蛋白偶聯(lián)受體激酶相互作用蛋白2抗體
豬多藥耐藥相關蛋白(MRP)D-氨酸間隙連接蛋白10抗體
豬熱休克蛋白60(HSP-60/HSPD1) D-氨酸間隙連結蛋白46/白內(nèi)障相關蛋白抗體
豬低分子肝素(LMWH) β-氨酸間隙連結蛋白50/白內(nèi)障相關蛋白抗體
豬吡哆激酶(PDXK) β-氨酸(標準品)間隙連結蛋白31.9抗體
豬β葡糖苷酶(β-Glu) D-色氨酸甘油激酶2抗體
豬神經(jīng)髓鞘蛋白(p2) D-酪氨酸β-半乳糖苷酶1/β-Gal/彈性蛋白受體1抗體
羊邊界病病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒SREBP-1 膽固調(diào)節(jié)元件結合蛋白1抗體二癸 97%
SREBP-2 膽固調(diào)節(jié)元件結合蛋白2抗體二正己 99%
srGAP3 精神障礙相關GAP蛋白抗體癸 98%
synaptotagmin-2 突觸結合蛋白相關因2抗體N,N-二丁 98%
Synaptotagmin-4 突觸結合蛋白4抗體二正辛 97%
SPATA12 特異表達新因5抗體異辛 99%
SRG11/Spata17 凋亡因抗體正己 99%
Synaptopodin 突觸蛋白synaptopodin抗體辛 99%
反應五要素:
參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
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