細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

公司向您推薦大鼠腎管狀上皮細(xì)胞說(shuō)明書(shū)的詳細(xì)說(shuō)明：

產(chǎn)品描述：提供的原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織，提供的人源原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來(lái)優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件，以降低雜細(xì)胞的污染，同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

      發(fā)貨：客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類(lèi)型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。科技提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程，保證細(xì)胞的純度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基；2、說(shuō)明書(shū)及注意事項(xiàng)；3、科技售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。

      保存和應(yīng)用：客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞，如是新鮮原代細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h，再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研，不得用于臨床應(yīng)用。
細(xì)胞株的培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)：
用于檢測(cè)細(xì)胞因子的細(xì)胞株通常培養(yǎng)于含10％小牛血清和抗生素的培養(yǎng)液中，培養(yǎng)對(duì)細(xì)胞因子有依賴(lài)性的細(xì)胞株時(shí)還有加入適量細(xì)胞因子。在37℃ 5％ CO2 的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)特性，在適當(dāng)?shù)臅r(shí)候進(jìn)行傳代，一般3～4 天傳代一次。
懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞的傳代：
直接離心后吸去培養(yǎng)上清液，用新鮮培養(yǎng)液稀釋?xiě)腋〖?xì)胞，一般按1：2-1：5 稀釋細(xì)胞后，分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。
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實(shí)驗(yàn)操作步驟： 
a．采用認(rèn)可的方案處死人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞嚙齒動(dòng)物。   
b．立即在無(wú)菌超凈臺(tái)內(nèi)用70％乙醇擦洗整個(gè)動(dòng)物。 
c．用無(wú)菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無(wú)菌鑷子將皮膚扯向后腿。   
d．用另一無(wú)菌的剪刀和鑷子切開(kāi)腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無(wú)菌的培養(yǎng)皿上。   
e．剔除胚胎周?chē)陌?，將胚胎放于無(wú)菌的含有無(wú)菌PBS的100ml燒杯中。   
f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。
實(shí)驗(yàn)材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè)； 人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞
3、50ml離心筒2個(gè)
4、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè)
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊；
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；
8、酒精燈1臺(tái)；

PALCAM 瓊脂平板對(duì)苯亞磺酸鈉 98%，無(wú)水物色氨酸肉湯pUNO1-hIL20

含   0.6% 酵 母 浸 膏 的 胰 酪 胨 大 豆 瓊 脂 （TSA-YE）對(duì)苯亞磺酸鈉 98%，水合物乳糖發(fā)酵管pUNO1-hIL20RA

含   0.6% 酵 母 浸 膏 的 胰 酪 胨 大 豆 肉 湯 （TSB-YE）三氟烷磺酸 98%Korser氏肉湯pUNO1-hIL20RB

10%酮酸鈉溶液三氟烷磺酸 99%MR-VPpUNO1-hIL21a

EB 肉湯增菌液基礎(chǔ)三氟烷磺酸酐 98%蛋白胨水（色氨酸肉湯）pUNO1-hIL21R

培養(yǎng)基三氟烷磺酸鐿水合物 99.9% metals basis衛(wèi)矛醇半固體pUNO1-hIL22

EB 肉湯增菌液添加劑硫酸氧鈦 synthesis grade山梨醇發(fā)酵管pUNO1-hIL22RA1

革蘭氏染色液硫酸氧鈦 93%二酸鹽pUNO1-hIL22RA2a

3%過(guò)氧化溶液十六胺 90%水楊苷發(fā)酵管pUNO1-hIL23(p40p19)

血瓊脂基礎(chǔ)油胺 C18：80-90% 賴(lài)氨酸脫羧酶肉湯pUNO1-hIL23R

大鼠腎管狀上皮細(xì)胞說(shuō)明書(shū)四二醇二醚 99%PCR八連排管帶蓋(平)，一套都有  八聯(lián)排管   0.2ml,PCR8聯(lián)排管,帶平蓋,無(wú)色,125排/盒,10盒/箱鬼臼提取物Rat Pfkm(6-phosphofructokinase, muscle type) ELISA Kit

Rat Gpi(Glucose-6-phosphate isomerase) ELISA Kit

氧化硼 99.99% metals basisPCR管(離心管）   0.2ml透明平蓋PCR薄壁管,1000/盒,10盒/箱纖維素酶Rat Ttr(Transthyretin) ELISA Kit

Rat Proc(Vitamin K-dependent protein C) ELISA Kit

氧化硼 99.999% metals basisPCR管(離心管）  0.2ml PCR 薄壁管(圓蓋)無(wú)色,1000支/盒;10盒/箱DL-Rat TLR4(Toll-like receptor 4) ELISA Kit

Rat Xdh(Xanthine dehydrogenase/oxidase) ELISA Kit

氧化硼 AR,98%,200目PCR管(離心管）  0.5ml 無(wú)色PCR平蓋薄壁管,1000個(gè)/盒,10盒/箱鹽酸強(qiáng)力（鹽酸多西環(huán)素）Rat Lipc(Hepatic triacylglycerol lipase) ELISA Kit

Rat Pdha1(Pyruvate dehydrogenase E1 component subunit alpha, somatic form, mitochondrial) ELISA Kit

氧化硼 99.9% metals basis,200目PCR八連排蓋(平),只有蓋子 ,熒光定量   0.2ml透明PCR八排管蓋(熒光定量),125 排/盒,10盒/箱水蛭素Rat Hcrt(Orexin) ELISA Kit

Rat Agt(Angiotensinogen) ELISA Kit

氧化鎵 99.99% metals basis96孔PCR板 無(wú)裙邊 0.2mL    0.2ml透明無(wú)裙邊96孔PCR板，未滅菌托伐普坦Rat Cck(Cholecystokinin) ELISA Kit

Rat Iapp(Islet amyloid polypeptide) ELISA Kit

氧化鎵 99.999% metals basis

96孔PCR板 半裙邊（黑色編號(hào) 透明板）   0.2ml透明半裙邊96孔PCR板，帶單切角，未滅菌山梨糖醇（山梨醇）Rat Hp(Haptoglobin) ELISA Kit

Rat F2r(Proteinase-activated receptor 1) ELISA Kit

羧基鍺倍半氧化物(GE 132) 99.95%96孔PCR板 半裙邊（透明編號(hào) 透明板） 96孔透明半裙邊PCR板，單切角，自然色浮雕孔定位對(duì)苯磺酰異氰酸酯Rat Vwf(von Willebrand factor) ELISA Kit

Rat Crh(Corticotropin Releasing Hormone) ELISA Kit

鍺 SP進(jìn)口封板膜    60µm CyclerSeal封板膜，用于儲(chǔ)存和PCR，未滅菌 100張/盒 5盒/箱硫酸鎂(七水硫酸鎂)Rat ACTH(Adrenocorticotropic Hormone) ELISA Kit

Rat Trh(Prothyroliberin) ELISA Kit

鍺粉 99.999% metals basis，1mm熒光定量pcr用高透明封板膜，100片/盒，5盒/箱  70um熒光定量PCR用高透明封板膜，未滅菌基六苯酐Rat PYGB(Glycogen phosphorylase, brain form) ELISA Kit

Rat PYGL(Glycogen phosphorylase, liver form) ELISA Kit