細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

公司向您推薦大鼠胰腺上皮細(xì)胞規(guī)格的詳細(xì)說明：

產(chǎn)品描述：提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織，提供的人源原代細(xì)胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件，以降低雜細(xì)胞的污染，同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

      發(fā)貨：客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度?？萍继峁┑募?xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程，保證細(xì)胞的純度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基；2、說明書及注意事項(xiàng)；3、科技售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。

      保存和應(yīng)用：客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞，如是新鮮原代細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h，再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研，不得用于臨床應(yīng)用。
細(xì)胞株的培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)：
用于檢測細(xì)胞因子的細(xì)胞株通常培養(yǎng)于含10％小牛血清和抗生素的培養(yǎng)液中，培養(yǎng)對細(xì)胞因子有依賴性的細(xì)胞株時(shí)還有加入適量細(xì)胞因子。在37℃ 5％ CO2 的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞生長特性，在適當(dāng)?shù)臅r(shí)候進(jìn)行傳代，一般3～4 天傳代一次。
懸浮生長細(xì)胞的傳代：
直接離心后吸去培養(yǎng)上清液，用新鮮培養(yǎng)液稀釋懸浮細(xì)胞，一般按1：2-1：5 稀釋細(xì)胞后，分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。
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實(shí)驗(yàn)操作步驟： 
a．采用認(rèn)可的方案處死人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞嚙齒動物。   
b．立即在無菌超凈臺內(nèi)用70％乙醇擦洗整個(gè)動物。 
c．用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。   
d．用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無菌的培養(yǎng)皿上。   
e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。   
f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。
實(shí)驗(yàn)材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè)； 人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞
3、50ml離心筒2個(gè)
4、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無菌玻璃攪拌棒1個(gè)
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊；
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；
8、酒精燈1臺；

GN 增菌液2,4,6-三嘧啶 98%乳糖（腦膜炎奈瑟氏菌）pUNO1-hLSP1a

SS 瓊脂三氟磺酸錫 98%蔗糖（腦膜炎奈瑟氏菌）pUNO1-hLTA

SS 瓊脂平板三氟烷磺酸銩 98%果糖（腦膜炎奈瑟氏菌）pUNO1-hLTBa

克氏雙糖鐵瓊脂（KI）三氟磺酸釔(III)  98% 吖啶黃素（3.0mg）pUNO1-hLTBR

克氏雙糖鐵瓊脂（KI）斜面（限供汽運(yùn)）三氟烷磺酸鐿 97%萘啶酮酸（5.0mg）pUNO1-hLTN

培養(yǎng)基三氟烷磺酸鐿水合物 99.9% metals basis膽汁七葉苷瓊脂pUNO1-hMAGEA3

尿素瓊脂基礎(chǔ)（pH7.2）三氟烷磺酸鋅 98%腦心浸液肉湯pUNO1-hMAP2K1

40%尿素溶液偶姻 97%含1%水楊苷的PY培養(yǎng)基pUNO1-hMAP2K2

尿素瓊脂斜面（pH7.2）偶姻 分析標(biāo)準(zhǔn)品，單聚體乳酸菌成套生化鑒定管pUNO1-hMAP3K14

尿素瓊脂斜面（pH7.2）偶姻 Natural,≥96%（GC), FCC麥芽糖發(fā)酵管pUNO1-hMAP3K3b

大鼠胰腺上皮細(xì)胞規(guī)格基環(huán)己烷 99%Cinnamaldehyde；肉桂醛莠滅凈Rat Adamts4(A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 4) ELISA Kit

Rat Reg4(RegeneRating islet-derived protein 4) ELISA Kit

基環(huán)己烷 for HPLC,≥99%α-Terpineol；α-松油醇葉黃素Rat Tnnt1(Troponin T, slow skeletal muscle) ELISA Kit

Rat Nfkb1(Nuclear factor NF-kappa-B p105 subunit) ELISA Kit

基環(huán)己烷  光譜級,≥99%Tacrolimus；他克莫司酸鈣稀釋劑Rat Prss1(Anionic trypsin-1) ELISA Kit

Rat Shh(Sonic hedgehog protein) ELISA Kit

基異基醇(MIBC)  99%Tamoxifen；他莫昔芬化鉀Rat TRY4(Trypsin-4) ELISA Kit

Rat Bsg(Basigin) ELISA Kit

異酰酸酯 98%3-Methylvaleric Acid；3-基戊酸荷荷巴油Rat Erbb2(Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2) ELISA Kit

Rat Mt2(Metallothionein-2) ELISA Kit

基異基酮  for HPLC, ≥99.5%Nateglinide；那格列奈小葉榕干粉Rat ACE2(Angiotensin-converting enzyme 2) ELISA Kit

Rat Lss(Lanosterol synthase) ELISA Kit

基異基酮 ACS, ≥98.5%Taraxasterol；蒲公英甾醇石油鈉Rat Prkaca(cAMP-dependent protein kinase catalytic subunit alpha) ELISA Kit

Rat Ogdh(2-oxoglutaRate dehydrogenase, mitochondrial) ELISA Kit

氨基酸酯 99%Hydroxytyrosol；羥基酪醇聚合鋁Rat Thra(Thyroid hormone receptor alpha) ELISA Kit

Rat Ctss(Cathepsin S) ELISA Kit

ACS，98.5%Palmatine hydrochloride；鹽酸巴馬汀/鹽酸掌葉防己堿人參提取物Rat Aanat(Serotonin N-acetyltransferase) ELISA Kit

Rat Ikbkb(Inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase subunit beta) ELISA Kit

叔醇鈉 98%Nomilin；諾米林羧基纖維素鈣Rat Cbs(Cystathionine beta-synthase) ELISA Kit

Rat SDC1(Syndecan-1) ELISA Kit