培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用 Countess®自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。
注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C?；蛘撸瑢⒀b有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。

 產(chǎn)品描述：提供的原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織，提供的人源原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來(lái)優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件，以降低雜細(xì)胞的污染，同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

      發(fā)貨：客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。科技提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程，保證細(xì)胞的純度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基；2、說(shuō)明書及注意事項(xiàng)；3、科技售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。

      保存和應(yīng)用：客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞，如是新鮮原代細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h，再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研，不得用于臨床應(yīng)用。

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細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取.

1%馬尿酸鈉溶液4-氧基苯酰 97%LS培養(yǎng)基pUNO1-hGABARAPL1

水合茚三酮溶液對(duì)氧基苯酸 CP,98.0%Culture培養(yǎng)基pUNO1-hGAS6

3.5%試驗(yàn)對(duì)氧基苯酸 98%瓊脂LT100pUNO1-hGAX

1%甘氨酸生長(zhǎng)試驗(yàn)3-氧基苯腈  98%NGKG寒天基礎(chǔ)培地pUNO1-hGBP2

半胱氨酸產(chǎn)硫化試驗(yàn)3-酰 98%GYP白亞瓊脂培養(yǎng)基pUNO1-hGBP5

培養(yǎng)基腈 CP（?。├业鞍灼咸烟侨鉁?/font>pUNO1-hGCNT1

鹽還原試驗(yàn)腈 99%（?。┲гw培養(yǎng)基pUNO1-hGCNT2a

鹽還原試劑腈 分析標(biāo)準(zhǔn)品EG培養(yǎng)基pUNO1-hGCNT3

Hugh-Leifson 培養(yǎng)基O/F 試驗(yàn)用腈 Standard for GCSBG增菌液pUNO1-hGCSFb

半固體儲(chǔ)存培養(yǎng)基限供汽運(yùn)原酸三酯  97% BCP寒天培地（含瓊脂）pUNO1-hGDNFa

大鼠冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞規(guī)格雌三醇 USP伏立康唑梔子提取物（梔子苷）Porcine IL-22(Interleukin 22) ELISA Kit

Porcine IL-7(Interleukin 7) ELISA Kit

雌三醇 分析標(biāo)準(zhǔn)品伏立康唑優(yōu)質(zhì)蝦粉Porcine CLDN2(Claudin-2) ELISA Kit

Porcine CLDN3(Claudin-3) ELISA Kit

雌二醇 98%米卡芬凈鈉異構(gòu)十醇聚氧烯醚Porcine CLDN7(Claudin-7) ELISA Kit

Porcine APLN(Apelin) ELISA Kit

雌二醇 99%,用于細(xì)胞培養(yǎng)米卡芬凈鈉芹菜素Porcine Casp8(Caspase 8) ELISA Kit

Porcine REN(Renin) ELISA Kit

雌二醇 USP級(jí)硫酸銨 AR級(jí)別透明質(zhì)酸鈉Porcine D2D(D-Dimer) ELISA Kit

Porcine TIMP3(Metalloproteinase inhibitor 3) ELISA Kit

雌二醇 分析標(biāo)準(zhǔn)品，99.5%硫酸銨 GR級(jí)別黃蜂蠟Porcine NT-ProANP(N-Terminal Pro Atrial Natriuretic Peptide) ELISA Kit

Porcine Casp9(Caspase 9) ELISA Kit

氧化鋁 ARFurazolidone 呋喃唑酮交酯Porcine PECAM-1(Plaet/Endothelial Cell Adhesion Molecule 1) ELISA Kit

Porcine FABP4(Fatty acid-binding protein, adipocyte) ELISA Kit

氧化鋁 SP,99.999%Furazolidone 呋喃唑酮3-(4-苯氧基)-1H- 吡唑并[3,4-D]嘧啶-4-胺Porcine VCAM1(Vascular cell adhesion protein 1) ELISA Kit

Porcine PMAP23(Antibacterial peptide PMAP 23) ELISA Kit

 氧化鋁  99.998% metals basis ,5～6μm,粉末Tilmicosin 替米星水飛薊賓葡胺Porcine HER2(Epidermal growth factor receptor 2) ELISA Kit

Porcine SAA(Serum amyloid A protein) ELISA Kit

氧化鋁 99．99%，鍍膜Tilmicosin 替米星黑米粉Porcine ANG1(Angiopoietin-1) ELISA Kit

Porcine P3(Caspase 3) ELISA Kit