實驗操作步驟： 
a．采用認可的方案處死人皮膚成纖維細胞,CCC-HSF-1細胞嚙齒動物。   
b．立即在無菌超凈臺內(nèi)用70％乙醇擦洗整個動物。 
c．用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。   
d．用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無菌的培養(yǎng)皿上。   
e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。   
f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。

公司向您推薦大鼠膀胱成纖維細胞的詳細說明：

產(chǎn)品描述：提供的原代細胞均來自新鮮組織，提供的人源原代細胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細胞的組織采集是根據(jù)標準方案進行。細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件，以降低雜細胞的污染，同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在技術(shù)部標準的操作流程下，原代細胞可以保持分化狀態(tài)，進而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

      發(fā)貨：客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細胞密度?？萍继峁┑募毎袠藴实蔫b定流程，保證細胞的純度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基；2、說明書及注意事項；3、科技售后服務(wù)標準。

      保存和應(yīng)用：客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞，如是新鮮原代細胞，客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h，再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞，客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復(fù)蘇。該細胞只可用于科研，不得用于臨床應(yīng)用。
細胞株的培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)：
用于檢測細胞因子的細胞株通常培養(yǎng)于含10％小牛血清和抗生素的培養(yǎng)液中，培養(yǎng)對細胞因子有依賴性的細胞株時還有加入適量細胞因子。在37℃ 5％ CO2 的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細胞生長特性，在適當?shù)臅r候進行傳代，一般3～4 天傳代一次。
懸浮生長細胞的傳代：
直接離心后吸去培養(yǎng)上清液，用新鮮培養(yǎng)液稀釋懸浮細胞，一般按1：2-1：5 稀釋細胞后，分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。
?
實驗材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個； 人皮膚成纖維細胞,CCC-HSF-1細胞
3、50ml離心筒2個
4、滅菌培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個
6、細胞計數(shù)板1塊；
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；
8、酒精燈1臺；

鹽還原試劑基脲 97%沙門氏菌成套生化鑒定管pUNO1-hHSPB8

乳糖-明膠培養(yǎng)基基脲 98%改良胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基（mTSB）pUNO1-hICAM1

乳糖-明膠培養(yǎng)基N-脲 97%萘啶酮酸2.25mgpUNO1-hICEBERG

硫醇酸鹽流體培養(yǎng)基間苯二酸二酯-5-磺酸鈉 98%酪蛋白瓊脂平板pUNO1-hID1a

菌種培養(yǎng)基環(huán)基胺 98%甘露醇卵黃培養(yǎng)基（顆粒）pUNO1-hID2

培養(yǎng)基5,5-二基-1-吡咯啉-N-氧化物 97%含225ml胰蛋白胨稀釋液pUNO1-hID3

四環(huán)素族檢定培養(yǎng)基N-對苯磺酰甘氨酸 98%液體菌種保存管pUNO1-hID4

溶菌酶多粘菌素瓊脂基礎(chǔ)阿斯巴甜 98%CPC瓊脂基礎(chǔ)pUNO1-hIFI16

多粘菌素 B（300IU/ml）N-酰-D-氨基葡萄糖 98%CPC瓊脂添加劑pUNO1-hIFIT1

溶菌酶（2000 萬 IU/g)N-酰-D-氨基葡萄糖 97%含225ml蛋白胨-NaCl-纖維二糖（PNC）肉湯均質(zhì)袋pUNO1-hIFIT2

大鼠膀胱成纖維細胞三二醇 97%慶大藥敏實驗紙片（擴散法） CN 10ug酰左旋肉堿鹽酸鹽Rat SGLT2(Sodium/glucose cotransporter 2) ELISA Kit

Rat NGF/NGFβ(Beta-nerve growth factor) ELISA Kit

三二醇 75℃＋＋＋卡那 K 30ug頭孢唑肟鈉Rat -3(Neurotrophin 3) ELISA Kit

Rat PDGF-AB(Plaet-Derived Growth Factor AB) ELISA Kit

三二醇 CP林可 2ug氨芐西林（氨芐青）Rat Rantes(Regulated On Activation, Normal T-Cell Expressed and Secreted) ELISA Kit

Rat GSK3β(Glycogen synthase kinase-3 beta) ELISA Kit

三二醇 99%米諾環(huán)素藥敏實驗紙片（擴散法） MH 30ug交聯(lián)羧基纖維素鈉Rat TGFBI(Transforming Growth Factor Beta Induced Protein) ELISA Kit

Rat TGF-β2(Transforming Growth Factor Beta 2) ELISA Kit

三縮四二醇 99%新N 30ug夫西地酸Rat TGF-β3(Transforming Growth Factor Beta 3) ELISA Kit

Rat TIMP-1(Tissue Inhibitors of Metalloproteinase 1) ELISA Kit

腈 >99.5%(GC)呋喃妥因 F 300ug煙酰胺腺嘌呤二核苷酸Rat TIMP-2(Tissue Inhibitors of Metalloproteinase 2) ELISA Kit

Rat CSNK2B(Casein kinase II subunit beta) ELISA Kit

二二醇 CP新生 NV 5ug基環(huán)戊烯醇酮Rat VEGF(Vascular Endothelial cell Growth Factor) ELISA Kit

Rat Alb(Serum albumin) ELISA Kit

一縮二二醇 >99%(GC)青藥敏實驗紙片（擴散法） P 10ug二基-β-環(huán)糊精Rat Afp(Alpha-fetoprotein) ELISA Kit

Rat Prl(Prolactin) ELISA Kit

二醇 Standard for GC,≥99.5%多粘菌素B PB 300ug對溴苯烯Rat Tshb(Thyrotropin subunit beta) ELISA Kit

Rat BMP-4(Bone morphogenetic protein 4) ELISA Kit

二醇 AR,98%鏈 S 10ug復(fù)合酵素Rat IGFBP-1(Insulin-like growth factor-binding protein 1) ELISA Kit

Rat IGFBP-2(Insulin-like growth factor-binding protein 2) ELISA Kit

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。