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當(dāng)前位置:上海研生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞培養(yǎng)>>原代細(xì)胞>> 大鼠肺大靜脈平滑肌細(xì)胞規(guī)格
產(chǎn)品描述:提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織,提供的人源原代細(xì)胞均來自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件,以降低雜細(xì)胞的污染,同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下,原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài),進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。科技提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程,保證細(xì)胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項(xiàng);3、科技售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮原代細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
大鼠肺大靜脈平滑肌細(xì)胞規(guī)格 | 5×105 | YS-X6543 |
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細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn):
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,同時(shí),可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時(shí),可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
培養(yǎng)操作:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取.
革蘭氏染色液積雪草酸 98%MRS肉湯pUNO1-hBDNFa
3%過氧化溶液 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥97%雙歧桿菌BS培養(yǎng)基pUNO1-hBECN1
0.5%蔗糖發(fā)酵管土木香內(nèi)酯 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥97%(HPLC)氯化血紅素pUNO1-hFGF2
0.5%纖維二糖發(fā)酵管異補(bǔ)骨脂素 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>98%維生素K1pUNO1-hBIK
0.5%麥芽糖發(fā)酵管蘆薈寧 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99%含0.6%酵母膏的胰酪胨大豆肉湯(TSB-YE)pUNO1-hBINCARD
0.5%甘露醇發(fā)酵管脫水羊藿素 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99%(HPLC)萘啶酮酸pUNO1-hBIRC8
0.5%水楊苷發(fā)酵管硫辛酸 98%含0.6%酵母膏的胰酪胨大豆瓊脂(TSA-YE)pUNO1-hBMP4
0.5%山梨醇發(fā)酵管白果內(nèi)酯 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99%OXA添加劑pUNO1-hBMP7
0.5%乳糖發(fā)酵管甜菜堿,無(wú)水 98%緩沖李氏菌增菌肉湯基礎(chǔ)添加劑pUNO1-hBPI
0.5%棉子糖發(fā)酵管黃芩素 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98%LPM瓊脂添加劑pUNO1-hBRAK
大鼠肺大靜脈平滑肌細(xì)胞規(guī)格間酚標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml,溶劑:醇SYBR Green I(電泳級(jí),10000×)左旋-反式-1,2-環(huán)已二胺Mouse SPA(Pulmonary Surfactant Associated Protein A) ELISA Kit
Mouse STAT1(Signal Transducer And Activator Of Transcription 1) ELISA Kit
間酚標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.98mg/ml,基體:醇SYBR Green I(電泳級(jí),10000×)豆甾醇Mouse STAT2(Signal Transducer And Activator Of Transcription 2) ELISA Kit
Mouse STAT4(Signal Transducer And Activator Of Transcription 4) ELISA Kit
間氯苯酚標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml,溶劑:醇SYBR Green I(電泳級(jí),10000×)鹽酸異腎上腺素Mouse STAT6(Signal Transducer And Activator Of Transcription 6) ELISA Kit
Mouse STUB1(E3 ubiquitin-protein ligase CHIP) ELISA Kit
鄰苯二酚標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml,溶劑:醇SYBR Green II(電泳級(jí),10000×)芐叉酮Mouse sVCAM-1(soluble vasccular cell adhesion molecule 1) ELISA Kit
Mouse SYP(Synaptophysin) ELISA Kit
水質(zhì)化學(xué)需氧量標(biāo)樣套裝濃度范圍49.4-208(mg/L),分3個(gè)梯度: 94SYBR Green I(電泳級(jí),20X)谷二肽(力肽)(L-氨酰-L-谷氨酰胺)Mouse SYT1(Synaptotagmin 1) ELISA Kit
Mouse TACR2(Tachykinin Receptor 2) ELISA Kit
化學(xué)需氧量標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)分析標(biāo)準(zhǔn)品,含氯水質(zhì)SYBR Green II(電泳級(jí),10000×)GL-15Mouse TAFI(Thrombin activatable fibrinolysis inhibitor) ELISA Kit
Mouse TARC(Thymus Activation Regulated Chemokine) ELISA Kit
水質(zhì)總標(biāo)樣 65.6ug/L,分析標(biāo)準(zhǔn)品SYBR Green II(電泳級(jí),10000×)卡培他濱Mouse TAT(Thrombin-Antithrombin Complex) ELISA Kit
Mouse TBG(Thyroxine Binding Globulin) ELISA Kit
濃度范圍:0.299-79.3(mg/L),分析標(biāo)準(zhǔn)品SYTO9染料 做細(xì)胞染色,cel finder可以替代 用來做PCR定量的話,super Green I可以替代
磷霉素鈣Mouse TBP2(Thioredoxin Binding Protein 2) ELISA Kit
Mouse TCC C5b-9(Terminal Complement Complex C5b-9) ELISA Kit
水質(zhì)電導(dǎo)率標(biāo)樣 分析標(biāo)準(zhǔn)品10000*gelgreen 核酸染料 biotium磷霉素鈣Mouse TDG1(TeRatocarcinoma Derived Growth Factor 1) ELISA Kit
Mouse TDP43(TAR DNA Binding Protein 43) ELISA Kit
醇中氯代苯類混合標(biāo)樣氯代苯類:氯苯、1, 2-二氯苯、1, 4-二10000*gelred 核酸染料 biotium靛紅酸酐Mouse TECK(Thymus Expressed Chemokine) ELISA Kit
Mouse TF(Tissue factor) ELISA Kit
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案:
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案,必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲(chǔ)存,直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí),利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用 Countess®自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度,計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。
注:離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀,將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí),應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞,使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C?;蛘撸瑢⒀b有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
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