細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

公司向您推薦大鼠肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的詳細(xì)說明：

產(chǎn)品描述：提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織，提供的人源原代細(xì)胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件，以降低雜細(xì)胞的污染，同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

      發(fā)貨：客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度?？萍继峁┑募?xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程，保證細(xì)胞的純度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基；2、說明書及注意事項(xiàng)；3、科技售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。

      保存和應(yīng)用：客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞，如是新鮮原代細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h，再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研，不得用于臨床應(yīng)用。
細(xì)胞株的培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)：
用于檢測細(xì)胞因子的細(xì)胞株通常培養(yǎng)于含10％小牛血清和抗生素的培養(yǎng)液中，培養(yǎng)對(duì)細(xì)胞因子有依賴性的細(xì)胞株時(shí)還有加入適量細(xì)胞因子。在37℃ 5％ CO2 的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞生長特性，在適當(dāng)?shù)臅r(shí)候進(jìn)行傳代，一般3～4 天傳代一次。
懸浮生長細(xì)胞的傳代：
直接離心后吸去培養(yǎng)上清液，用新鮮培養(yǎng)液稀釋懸浮細(xì)胞，一般按1：2-1：5 稀釋細(xì)胞后，分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。

實(shí)驗(yàn)操作步驟： 
a．采用認(rèn)可的方案處死人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞嚙齒動(dòng)物。   
b．立即在無菌超凈臺(tái)內(nèi)用70％乙醇擦洗整個(gè)動(dòng)物。 
c．用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。   
d．用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無菌的培養(yǎng)皿上。   
e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。   
f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。
實(shí)驗(yàn)材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè)； 人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞
3、50ml離心筒2個(gè)
4、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無菌玻璃攪拌棒1個(gè)
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊；
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；
8、酒精燈1臺(tái)；

十六烷基三基溴化銨培養(yǎng)基隱綠原酸 分析標(biāo)準(zhǔn)品液體培養(yǎng)基pUNO1-hCCR7

酰胺培養(yǎng)基洋薊素 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%麥芽汁瓊脂pUNO1-hCCR8

綠膿菌素測定培養(yǎng)基PDP基礎(chǔ)大黃酚 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%Preston肉湯基礎(chǔ)pUNO1-hCCR9

甘油大黃酚 97%YM培養(yǎng)基pUNO1-hCCRL2a

綠膿菌素測定用培養(yǎng)基PDP斜面限供汽運(yùn)去斑蝥素 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%布氏肉湯添加劑pUNO1-hCD101

培養(yǎng)基 95%WLN培養(yǎng)基pUNO1-hCSF2RAa

明膠生化管黃豆苷 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥96%梭菌屬測定用培養(yǎng)基pUNO1-hCD14

明膠培養(yǎng)基黃豆苷 95營養(yǎng)瓊脂pUNO1-hCD147b

硝酸鹽蛋白胨水培養(yǎng)基2,6-二氯-3-硝基吡啶 97%小肉湯培養(yǎng)基pUNO1-hCD148a

營養(yǎng)瓊脂NA二辣椒堿 分析標(biāo)準(zhǔn)品 硫酸慶大霉素pUNO1-hCD14s

大鼠肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞p, p’-DDD標(biāo)準(zhǔn)溶液10μg/ml,u=7%,溶劑:石油醚Abamectin 阿維菌素5-硫基四氮唑Mouse IL-12(Interleukin 12) ELISA Kit

Mouse HMG-CoA Reductase(3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A reductase) ELISA Kit

o，p’-DDT標(biāo)準(zhǔn)溶液100μg/ml,溶劑：醇Abamectin 阿維菌素十喹啉Mouse esRAGE(Endogenous secretory Advanced Glycosylation End Product Specific Receptor) ELISA Kit

Mouse GSK3β(Glycogen synthase kinase-3 beta) ELISA Kit

o，p’-DDT標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=2%Amoxicillin 阿莫西林海帶多糖Mouse IL-20(Interleukin 20) ELISA Kit

Mouse Gpsm1(G-protein-signaling modulator 1) ELISA Kit

o，p’-DDT標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=4%Amoxicillin 阿莫西林比卡魯胺Mouse HSPA5(78 kDa glucose-regulated protein) ELISA Kit

Mouse CYB5A(Cytochrome b5) ELISA Kit

苯標(biāo)準(zhǔn)溶液1000ppm，基質(zhì)：醇Amoxicillin 阿莫西林三水/羥氨芐青霉素磺芐西林鈉Mouse Sectm1a(Secreted and transmembrane protein 1A) ELISA Kit

Mouse Mcpt1(Mast cell protease 1) ELISA Kit

異標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml，溶劑：醇Amphotericin B solubilized 可溶性兩性霉素B 孕烯醇酮Mouse AP12(Apelin 12) ELISA Kit

Mouse TNFSF15(Tumor necrosis factor ligand super family member 15) ELISA Kit

苯標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml，溶劑：二硫化碳Amphotericin B solubilized 可溶性兩性霉素B磷酸膽堿Mouse 8-iso-PGF2α(8-isoprostane) ELISA Kit

Mouse NLRP1(NLR Family, Pyrin Domain Containing 1) ELISA Kit

苯標(biāo)準(zhǔn)溶液1000μg/ml，溶劑：醇Amphotericin B solubilized 可溶性兩性霉素B  Amresco   無異甘草素Mouse PFK(ATP-dependent 6-phosphofructokinase) ELISA Kit

Mouse 4-HNE(4-Hydroxynonenal) ELISA Kit

苯標(biāo)準(zhǔn)溶液 1 mg/ml in Amphotericin B solubilized 可溶性兩性霉素B  Amresco   無三聚磷酸硅Mouse BARK1(Beta Adrenergic Receptor Kinase -1) ELISA Kit

Mouse FLT3(Receptor-type tyrosine-protein kinase FLT3) ELISA Kit

基汞標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml，溶劑：苯Amphotericin B solubilized 可溶性兩性霉素B  Amresco   無金縷梅提取物Mouse NK1R(Neurokinin-1 receptor) ELISA Kit

Mouse NLRP3(Nod Like Receptor Pyrins-3) ELISA Kit