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當(dāng)前位置:上海研生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞培養(yǎng)>>原代細(xì)胞>> 大鼠支氣管平滑肌細(xì)胞規(guī)格
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn):
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,同時(shí),可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時(shí),可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
產(chǎn)品描述:提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織,提供的人源原代細(xì)胞均來自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件,以降低雜細(xì)胞的污染,同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下,原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài),進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。科技提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程,保證細(xì)胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項(xiàng);3、科技售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮原代細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用.
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
大鼠支氣管平滑肌細(xì)胞規(guī)格 | 5×105 | YS-X6551 |
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培養(yǎng)操作:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取.
SCDLP 瓊脂基礎(chǔ)SCDLPA Base人參皂甙 Rg1 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>98% 液體硫醇酸鹽培養(yǎng)基管pUNO1-hCD37a
SCDLP 液體培養(yǎng)基基礎(chǔ)Soya Casein Digest Lecithin Polysorbate BaseBroth人參皂甙 Rg2 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>98%YPDA培養(yǎng)基pUNO1-hCD39a
Dey/Engley 中和肉湯基礎(chǔ)Dey/Engley Neutralizing Broth Base人參皂甙 Rg3 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>98% 改良MSRV培養(yǎng)基pUNO1-hCD3Da
大豆-酪蛋白消化物液體培養(yǎng)基Fluid Soybean-Casein Digest Medium人參皂甙 Rc 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>98%哥倫比亞血瓊脂基礎(chǔ)(改良)pUNO1-hCD3E
無菌采樣袋/均質(zhì)袋人參皂甙 Rd 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>98%DTM添加劑1pUNO1-hCD4
培養(yǎng)基人參皂甙 Re 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>98%DTM添加劑2pUNO1-hCD40a
平板計(jì)數(shù)瓊脂PCA人參皂苷Rh1 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98%平板計(jì)數(shù)肉湯(PCB)pUNO1-hCD40LG
平板計(jì)數(shù)瓊脂平板PCA人參皂苷Rf 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98%氯霉素麥芽提取物瓊脂培養(yǎng)基pUNO1-hCD44d
磷酸鹽緩沖液pH7.2甘草酸銨鹽 97%麥康凱肌醇阿東醇羧卞青霉素瓊脂(MZAC)pUNO1-hCD45a
無菌磷酸鹽緩沖液pH7.2甘草次酸(β型) 97%支原體半流培養(yǎng)基pUNO1-hCD47b
大鼠支氣管平滑肌細(xì)胞規(guī)格δ-六六六標(biāo)準(zhǔn)溶液 50µg/mL,基體:醇:苯=4:1Carbenicillin Disodium Salt 羧芐青霉素鈉鹽 姜黃素Mouse INSL3(Insulin-Like 3) ELISA Kit
Mouse NEFL(Neurofilament light polypeptide) ELISA Kit
δ-六六六標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=3%Carbenicillin Disodium Salt 羧芐青霉素鈉鹽 Amresco 缺貨聚磷酸銨(多聚磷酸銨)Mouse Camp(Cathelicidin Antimicrobial Peptide) ELISA Kit
Mouse Asprosin(Asprosin) ELISA Kit
δ-六六六標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=6%Carbenicillin Disodium Salt 羧芐青霉素鈉鹽 Amresco 缺貨魚露Mouse Serpina3c(Serine protease inhibitor A3C) ELISA Kit
Mouse FAM3D(Protein FAM3D) ELISA Kit
濃度范圍:10.0-30.0(mg/L),分析標(biāo)準(zhǔn)品Carbenicillin Disodium Salt 羧芐青霉素鈉鹽 Germany 缺貨酪蛋白胨Mouse Mcpt4(Mast cell protease 4) ELISA Kit
Mouse ELOVL7(Elongation of very long chain fatty acids protein 7) ELISA Kit
異苯標(biāo)準(zhǔn)溶液1mg/ml,溶劑:醇Carbenicillin Disodium Salt 羧芐青霉素鈉鹽 Germany 缺貨黃連素Mouse DA(Dopamine) ELISA Kit
Mouse Qprt(Nicotinate-nucleotide pyrophosphorylase [carboxylating]) ELISA Kit
異苯標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml,溶劑:二硫化碳Carbenicillin Disodium Salt 羧芐青霉素鈉鹽 Germany 缺貨鹽酸阿比朵爾Mouse MASP2 ELISA Kit
Mouse MN(Metanephrine) ELISA Kit
異苯標(biāo)準(zhǔn)溶液1000μg/ml,溶劑:醇Cefadroxil 頭孢羥氨芐草莓香精Mouse COR(Cortisol) ELISA Kit
Mouse Grin1 ELISA Kit
異苯標(biāo)準(zhǔn)溶液1mg/ml,溶劑:醇Cefadroxil 頭孢羥氨芐一水甜橙香精Mouse MDA(Malonaldehyde) ELISA Kit
Mouse Lrp2(Low-density lipoprotein receptor-related protein 2) ELISA Kit
鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000mg/L,溶劑:1%鹽酸Cefadroxil 頭孢羥氨芐一水羥基磺酸鈉Mouse Plg(Plasminogen) ELISA Kit
Mouse NUP62(nucleoporin p62) ELISA Kit
鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液 500mg/L,溶劑:1%鹽酸Cefadroxil 頭孢羥氨芐一水豬去氧膽酸Mouse Enho(Adropin) ELISA Kit
Mouse preptin ELISA Kit
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案:
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案,必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲(chǔ)存,直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí),利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用 Countess®自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度,計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。
注:離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀,將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí),應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞,使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C?;蛘撸瑢⒀b有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
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