參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：豬瘟病毒野生株染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

產(chǎn)品貨號：YS-P013548

產(chǎn)品規(guī)格：50次

產(chǎn)品分類：PCR檢測試劑盒

產(chǎn)品運輸：低溫運輸

產(chǎn)品保存：-20℃保存

產(chǎn)品有效期：一年

產(chǎn)品特點：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。

特點優(yōu)勢：

1.   特異性：所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過TIANDZ及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。

2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。

3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。

4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。

5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除TIANDZ公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。

6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐

的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。
實驗過程：

一、試劑準(zhǔn)備

1. DNA模板

2．公司產(chǎn)品僅用于科研對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）

3．10×PCR Buffer

4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM

5．Taq酶

二、操作步驟

1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。

10×PCR buffer             5μl

dNTP mixl                 4μl

引物1（10pM）               2μl

引物2（10PM）              2μl

Taq酶（2U/μl）            1μl

DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl

加ddH2O至               50 μl

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。

3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

使用方法：

一、樣品采集：

1、食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗要求進行。

2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。

3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。

4、病灶部位樣品：取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。

一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。

2. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液（最好用帶芯槍頭，下同）。

4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用

6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

豬粘膜相關(guān)上皮趨化因子(MEC/CCL28) 十二烷溴化銨核膜糖蛋白210抗體

豬白血病抑制因子受體(LIFR)CTAB；十六烷溴化銨GADD153抗體

豬晶體蛋白(CLC) CTAC;十六烷氯化銨G蛋白偶聯(lián)受體57抗體

豬髓鞘相關(guān)糖蛋白(MAG)  十八烷氯化銨GSK-3結(jié)合蛋白FRAT2抗體

豬11去氫血栓烷B2(11-DH-TXB2) STAB；十八烷溴化銨磷酸化內(nèi)收蛋白gamma抗體

豬抗角蛋白絲聚集素/絲集蛋白抗體(AFA) 十烷溴化銨生長因子受體結(jié)合適應(yīng)蛋白抗體

豬FMS樣酪氨酸激酶3(Flt3) EHDAB；十六烷二溴化銨GARNL3蛋白抗體

豬前膠原C端肽酶(PCP) 十二烷二溴化銨Tuberin樣蛋白1抗體

豬α羥丁酸脫氫酶(αHBDH) 十四烷二芐氯化銨X連鎖Charcot-Marie-Tooth變相關(guān)蛋白抗體

豬蕈堿型酰膽堿受體亞型M2(M-AChRM2)HDBAC；十六烷二芐氯化銨甘氨酰核苷酸合成酶抗體

豬碳酸酐酶VB(CA5B)十烷氯化銨生長休止特定蛋白2抗體

豬P62抗體(AP62A)辛氯化銨;八烷氯化銨G蛋白γ11/Gγ11 抗體

豬著絲粒蛋白I(CENPI) 2-溴溴化銨磷酸化肌動蛋白結(jié)合蛋白Girdin抗體

豬核糖體蛋白L10(RPL10)3-溴溴化銨(BPTAB)γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶7重鏈抗體

豬葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)十二烷二芐氯化銨生長激素2/胎盤特異性生長激素抗體

豬亞四氫葉酸還原酶(MTHFR)DDAB；雙十烷二溴化銨高爾體相關(guān)蛋白GM130抗體
豬瘟病毒野生株染料法熒光定量RT-PCR試劑盒Phospho-SHIP2 (Tyr986/987)  磷酸化蛋白酪氨酸磷酸酶2抗體直接黑38 分析標(biāo)準(zhǔn)品

Phospho-SHIP2 (Tyr580)  磷酸化蛋白酪氨酸磷酸酶2抗體分散橙 分析標(biāo)準(zhǔn)品

SIAH1  泛素連接酶Siah1抗體分散黃 3 分析標(biāo)準(zhǔn)品

SIAH2  泛素連接酶Siah2分散藍3 分析標(biāo)準(zhǔn)品

SIP1  運動神經(jīng)元存活蛋白結(jié)合蛋白1抗體分散藍7 分析標(biāo)準(zhǔn)品

SIRT1  沉默調(diào)節(jié)蛋白1抗體分散藍102 分析標(biāo)準(zhǔn)品

Phospho-SirT1 (Ser27)  磷酸化沉默調(diào)節(jié)蛋白1抗體分散藍106 分析標(biāo)準(zhǔn)品

Phospho-SirT1 (Ser47)  磷酸化沉默調(diào)節(jié)蛋白1抗體分散紅1 分析標(biāo)準(zhǔn)品