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當(dāng)前位置:上海研生實(shí)業(yè)有限公司>>PCR類>>熒光定量PCR試劑盒>> 50次甲基營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿菌染料法qPCR試劑盒
規(guī)格 | 50次 | 貨號(hào) | YS-P013643 |
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品牌 | YSRIBIO |
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
服務(wù)流程:
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
甲基營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿菌染料法qPCR試劑盒 | 50次 | YS-P013643 |
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測(cè)中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡(jiǎn)便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
猴去唾液酸糖蛋白受體2(ASGR2)AG490,AG-490氯離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白KCC4抗體
猴抑制蛋白β1(ARRβ1)靈芝酸F(標(biāo)準(zhǔn)品)磷酸化離子通道蛋白Kv1.3抗體
猴白介素17(IL-17)熊去氧膽酸(UDCA)標(biāo)準(zhǔn)品離子通道蛋白家族成員4抗體
猴胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白5(IGFBP-5)熊去氧膽酸(UDCA)電壓門控性通道蛋白亞kv5.1抗體
猴核轉(zhuǎn)錄因子Y亞γ(NFYC)鹽酸頭孢他美酯電壓門控性通道蛋白亞kv6.1抗體
猴粘蛋白6(MUC6)鹽酸頭孢他美酯(標(biāo)準(zhǔn)品)電壓門控性通道蛋白亞KV6.3抗體
猴Toll樣受體2(TLR2)L-生物喋呤磷酸化內(nèi)流通道蛋白KCNJ1抗體
猴泛素羧端酯酶L1(UCHL1)渥曼青霉素鈣激活通道蛋白KCNT2抗體
猴轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β激蛋白22(TSC22)溴化新斯的明內(nèi)流通道蛋白Kir5.1抗體
猴膠原酶II(Collagenase II) 溴化新斯的明(標(biāo)準(zhǔn)品)磷酸化內(nèi)流通道蛋白Kir5.1抗體
猴水通道蛋白3(AQP-3) 木蘭脂素磷酸化ATP敏感性通道亞kir6.2抗體
猴質(zhì)衍生因子4(SDF-4)消旋山莨菪堿電壓門控通道蛋白KVβ.2抗體
猴肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白B(SPB)電壓門控性通道蛋白Kv1.4抗體
猴膜聯(lián)蛋白A5(ANXA5 ) 酸,安息香酸電壓門控性通道Kv1.6抗體
猴因子受體樣因子1(CRLF1)酸,安息香酸(標(biāo)準(zhǔn)品)磷酸化通道蛋白DRK1抗體
猴蛋白酶激活受體1(PAR1)磺間二氧嘧啶鈉電壓門控性通道Kv2.2抗體
甲基營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿菌染料法qPCR試劑盒Batroxobin/FITC 熒光素標(biāo)記蛇******巴***曲***酶***抗***體IgGN-酰-3,5-二-L-酪氨酸 98%
Bax protein/FITC 熒光素標(biāo)記 Bax 蛋白抗體IgGD-氨酸酯鹽酸鹽 98%
Bax/FITC 熒光素標(biāo)記Bax抗體IgGN-酰-L-亮氨酸 98%
Bax(phospho Ser184) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠等磷酸化Bax抗體IgGN-酰-D-亮氨酸 99%
BBC3/PUMA /FITC 熒光素標(biāo)記p53正向凋亡調(diào)控因子抗體IgGDL-天冬酰,一水 99%
BCHE/FITC 熒光素標(biāo)記丁酰膽堿脂酶抗體(N端)IgGDL-天冬氨酸 98%
BCHE/FITC 熒光素標(biāo)記丁酰膽堿脂酶抗體(C端)IgGL-天門冬氨酸 99%
Bcl-2 protein/FITC 熒光素標(biāo)記 Bcl-2 蛋白抗體IgGL-氨酸叔丁酯鹽酸鹽 97%
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