培養(yǎng)細胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
3.采用血球計數器、細胞計數儀按照臺盼藍拒染法或者使用 Countess®自動細胞計數儀測定總細胞數和活細胞百分比。根據所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C?；蛘撸瑢⒀b有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

 產品描述：提供的原代細胞均來自新鮮組織，提供的人源原代細胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細胞的組織采集是根據標準方案進行。細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件，以降低雜細胞的污染，同時保證質量的穩(wěn)定。在技術部標準的操作流程下，原代細胞可以保持分化狀態(tài)，進而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調節(jié)特定基因的遺傳功能。

      發(fā)貨：客戶可根據自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應的細胞密度?？萍继峁┑募毎袠藴实蔫b定流程，保證細胞的純度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基；2、說明書及注意事項；3、科技售后服務標準。

      保存和應用：客戶可以根據自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞，如是新鮮原代細胞，客戶收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內靜置后2-3h，再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞，客戶收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復蘇。該細胞只可用于科研，不得用于臨床應用。

細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中，根據要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。
培養(yǎng)操作：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。      
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取.

沙氏葡萄糖肉湯Sabouraud-dextrose broth噻磺隆 分析標準品，98%NBB培養(yǎng)基pVITRO1-neo-GFP/SEAP

腸道菌增菌肉湯Enterobacteria enrichment broth-Mossel三環(huán)唑 分析標準品，99.3%RaKa-Ray培養(yǎng)基pVITRO1-neo-Lucia/SEAP

結晶紫中性紅膽鹽葡萄糖瓊脂Violet red bile glucose agar三環(huán)唑標準溶液100μg/ml,u=2%,溶劑:醇炭疽桿菌診斷抗原pVITRO1-neo-mcs

麥康凱肉湯MacConkey broth三環(huán)唑標準溶液10μg/ml,u=2%,溶劑:醇MiddleBrook7H10瓊脂pVITRO2-blasti-GFP/LacZ

麥康凱瓊脂MacConkey agar殺蟲單 分析標準品MiddleBrook7H11瓊脂pVITRO2-blasti-GFP/SEAP

RV 沙氏增菌肉湯Rappaport Vassiliadis Salmonella EnrichmentBroth戊唑醇 分析標準品，99%TGE培養(yǎng)基pVITRO2-blasti-Lucia/SEAP

木糖，賴氨酸，去氧膽酸鹽瓊脂Xylose, lysine, desoxycholate agar綠草定  分析標準品豬巴氏桿菌疫苗培養(yǎng)基pVITRO2-blasti-mcs

溴十六烷三銨瓊脂基礎Cetrimide agar base三十醇 分析標準品，98%醋酸鉛培養(yǎng)基pVITRO2-hygro-GFP/LacZ

甘露醇瓊脂培養(yǎng)基Mannitol-Salt Agar Medium氟樂靈 分析標準品，97%Tergitol-7瓊脂pVITRO2-hygro-GFP/SEAP

梭菌加強培養(yǎng)基Reinforced Medium for Clostridia氟樂靈標準溶液 100μg/ml,u=3% 氧化三胺培養(yǎng)基pVITRO2-hygro-Lucia/SEAP

小鼠角膜上皮細胞說明書鉬標準溶液 500 mg/L,溶劑:微量硫酸原位細胞凋亡試劑盒  （原裝50T）roche   原位細胞凋亡檢測試劑盒 tunel 原位細胞凋亡試劑盒肉桂酸鉀Mouse CGRP(Calcitonin Gene Related Peptide) ELISA Kit

Mouse CHE(Chemerin) ELISA Kit

鉬標準溶液 100µg/mL，基體: 1%HCl的盒子L-Mouse CHGA(Chromogranin A) ELISA Kit

Mouse CHRM2(Cholinergic Receptor, Muscarinic 2) ELISA Kit

鈮標準溶液 1000μg/mlDMEM (高)不含酮酸鈉  Gibco原裝氯沙坦Mouse C-jun(C-jun) ELISA Kit

Mouse CKLFSF4(Chemokine Like Factor Superfamily 4) ELISA Kit

鎳標準溶液 1000μg/mlDMEM/F-12  DMEM NUTRIENT MIX F12(DMEM/F-12) Gibco原裝 10*1L  二基苯基原醇Mouse CK-MB(Creatine Kinase MB Isoenzyme) ELISA Kit

Mouse CKMT1A(Creatine Kinase, Mitochondrial 1A) ELISA Kit

鎳標準溶液 500mg/L，溶劑：1%硝酸Proteinase K 蛋白酶K(原裝） 強力霉素Mouse CLCF1(Cardiotrophin Like Cytokine Factor 1) ELISA Kit

Mouse CLS(Cardiolipin Synthase) ELISA Kit

鎳標準溶液 100(20℃)μg/mL，基體:1%HNO3DMEM (高)  Gibco原裝利福平(利福定)Mouse c-myc(c-myc Oncogene Product) ELISA Kit

Mouse CNR1(Cannabinoid Receptor 1, Brain) ELISA Kit

鎳標準溶液 100μg/ml無噬菌體低內毒素特級胎牛血清潑尼松龍磷酸鈉Mouse CNR2(Cannabinoid Receptor 2) ELISA Kit

Mouse CNTN1(Contactin 1) ELISA Kit

亞硝酸鹽標準溶液 1000μg/ml3M高壓滅菌指示帶 20卷/箱  24mm*55m/卷苯酸鈉Mouse COL1(Collagen Type I) ELISA Kit

Mouse COL10(Collagen Type X) ELISA Kit

硝酸根離子(NO3-)標準溶液 1000μg/mlTrizol7-去膽固醇Mouse COL1α2(Collagen Type I Alpha 2) ELISA Kit

Mouse COL2(Collagen Type Ⅱ) ELISA Kit

硝酸根離子(NO4-)標準溶液500mg/L，溶劑：水Trizol檸檬酸鈉Mouse COL3(Collagen Type III) ELISA Kit

Mouse COL4(Collagen Type IV) ELISA Kit