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當(dāng)前位置:上海研生實(shí)業(yè)有限公司>>PCR類>>熒光定量PCR試劑盒>> 50次副百日咳桿菌檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法)
規(guī)格 | 50次 | 貨號(hào) | YS-P013811 |
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品牌 | YSRIBIO |
服務(wù)流程:
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
副百日咳桿菌檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法) | 50T | YS-P013811 |
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測(cè)中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡(jiǎn)便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
兔絨毛蛋白(CVL/EZR) 4-硝對(duì)三聯(lián)(>95.0%(GC))磷酸化急性髓白血病1蛋白抗體
兔白介素2(IL-2)3-硝聯(lián)(>99.0%(GC))DNA修復(fù)蛋白R(shí)ad23抗體
兔甘露糖凝集素受體(MBLR) 4-聯(lián)(>97.0%(GC))組織相容性復(fù)合物RTF1抗體
兔周期素依賴性激酶1(CDK1) 2-溴聯(lián)(>97.0%(GC))核糖核苷酸還原酶1抗體
兔TU3A蛋白(TU3A)3-氨聯(lián)(>99.0%(GC)(T))環(huán)指蛋白167抗體
兔半胱氨酰白三烯受體1(CYSLTR1) 3-溴聯(lián)(>98.0%(GC))抵抗素抗體
兔促性腺激素釋放激素(GnRH) 4-溴對(duì)三聯(lián)(>94.0%(GC))Ras特異性鳥嘌呤核苷酸釋放因子1
兔催乳素(PRL)4-聯(lián)酸(含有數(shù)量不等的酸酐)核糖體S6激酶RSK2抗體
兔補(bǔ)體成分5a(C5a)3-聯(lián)酸(含數(shù)量不等的酸酐)受體激活蛋白激酶C1抗體
兔淋巴趨化因子(Lptn/XCL1)2-(4-聯(lián))-4,4,5,5-四-1,3,2-二氧環(huán)戊烷(>98.0%(GC))孤兒核受體抗體
兔Ⅱ型膠原螺旋肽(HELIX-Ⅱ) 4-溴-4'-聯(lián)(>98.0%(GC))環(huán)指蛋白17抗體
兔視黃酸誘導(dǎo)因/RIG-1樣受體(RLR) 4,4'-二-3,3'-二聯(lián)(>98.0%(GC))呼吸道合胞病抗體
兔卷曲同源物8(FZD8) 4,4''-二氨對(duì)三聯(lián)(>98.0%(HPLC)(T))周期檢查控制蛋白質(zhì)抗體
兔胱天蛋白酶12(Casp12) 4,4''-二硝對(duì)三聯(lián)(>97.0%(N))磷酸化周期檢查控制蛋白質(zhì)抗體
兔促狀腺激素抗體(TSA)1-氨芘(>98.0%(HPLC)(T))磷酸化周期檢查控制蛋白質(zhì)抗體
兔血管生成素樣蛋白1(ANGPTL1) 1-溴芘(>94.0%(GC))磷酸化周期檢查控制蛋白質(zhì)抗體
副百日咳桿菌檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法)Insulin/FITC 熒光素標(biāo)記胰島素抗體IgGN--1-萘 98%
Insulin(1-51 protein)/FITC 熒光素標(biāo)記胰島素1-51蛋白抗體IgG正戊烷 >99.5%(GC)
Integrin alpha 1/CD49a/FITC 熒光素標(biāo)記整合素α1抗體IgG正戊烷 Standard for GC, ≥99.5% (GC)
Integrin Alpha2/CD49b/FITC 熒光素標(biāo)記整合素α2抗體IgG酚紅 AR
Integrin Alpha2b/CD41/FITC 熒光素標(biāo)記血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa抗體IgG酚紅 ACS
Integrin Alpha3/FITC 熒光素標(biāo)記整合素α3抗體IgG聚酰粉 柱層析用
Integrin Alpha3 Beta1/FITC 熒光素標(biāo)記整合素α3β1抗體IgG聚酰粉 60-80目
Integrin a7/FITC 熒光素標(biāo)記整合素α7抗體IgG吡啶 for HPLC, ≥99.9%
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