細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

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產(chǎn)品描述：提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織，提供的人源原代細(xì)胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件，以降低雜細(xì)胞的污染，同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

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細(xì)胞株的培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)：
用于檢測細(xì)胞因子的細(xì)胞株通常培養(yǎng)于含10％小牛血清和抗生素的培養(yǎng)液中，培養(yǎng)對細(xì)胞因子有依賴性的細(xì)胞株時還有加入適量細(xì)胞因子。在37℃ 5％ CO2 的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞生長特性，在適當(dāng)?shù)臅r候進(jìn)行傳代，一般3～4 天傳代一次。
懸浮生長細(xì)胞的傳代：
直接離心后吸去培養(yǎng)上清液，用新鮮培養(yǎng)液稀釋懸浮細(xì)胞，一般按1：2-1：5 稀釋細(xì)胞后，分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。
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實驗操作步驟： 
a．采用認(rèn)可的方案處死人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞嚙齒動物。   
b．立即在無菌超凈臺內(nèi)用70％乙醇擦洗整個動物。 
c．用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。   
d．用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無菌的培養(yǎng)皿上。   
e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。   
f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。
實驗材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個； 人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞
3、50ml離心筒2個
4、滅菌培養(yǎng)皿1個，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個
6、細(xì)胞計數(shù)板1塊；
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；
8、酒精燈1臺；

哥倫比亞瓊脂基礎(chǔ)Columbia Agar Base氟樂靈標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=5% CVT瓊脂pVITRO2-hygro-mcs

瓊脂培養(yǎng)基 C含抗生素的沙氏葡萄糖瓊脂Sabouraud-glucose Agar with antibiotics殺蟲脲 分析標(biāo)準(zhǔn)品Iron瓊脂pVITRO2-neo-GFP/LacZ

肉湯培養(yǎng)基 D水合乳糖肉湯Lactose Monohydrate Broth殺蟲脲標(biāo)準(zhǔn)溶液100μg/ml,u=2%,溶劑:異醇STAA培養(yǎng)基pVITRO2-neo-GFP/SEAP

肉湯培養(yǎng)基 I四硫磺酸鹽膽鹽亮綠肉湯Tetrathionate Bile Brilliant Green BrothTBG Broth殺蟲脲標(biāo)準(zhǔn)溶液10μg/ml,u=2%,溶劑:異醇發(fā)光菌培養(yǎng)基pVITRO2-neo-Lucia/SEAP

瓊脂培養(yǎng)基 J去氧膽酸檸檬酸瓊脂2,6-二基-4-十三烷基嗎啉 分析標(biāo)準(zhǔn)品，99%產(chǎn)組胺菌培養(yǎng)基pVITRO2-neo-mcs

瓊脂培養(yǎng)基 L亮綠，酚紅，水合乳糖，蔗糖瓊脂Brilliant Green, Phenol red, Lactose Monohydrate, Sucrose Agar苯磺隆 分析標(biāo)準(zhǔn)品，95%(腦)心浸液瓊脂pVIVO1-GFP/LacZ

瓊脂培養(yǎng)基 M三糖鐵瓊脂Triple Sugar, Iron Agar禾草丹 分析標(biāo)準(zhǔn)品，97%普通肉湯培養(yǎng)基pVIVO1-GFP/SEAP

甘油Glycerin滅菌唑 分析標(biāo)準(zhǔn)品，99.2%緩沖蛋白胨水（BPW）pVIVO1-Lucia/SEAP

瓊脂培養(yǎng)基 OBaird-Parker 瓊脂Baird-Parker Agar去草凈 分析標(biāo)準(zhǔn)品，99%三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品pVIVO1-mcs

硫酸慶大霉素Gentamicin sulfate殺蟲環(huán)標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=5%四硫磺酸鹽煌綠增菌液基礎(chǔ)(TTB)pVIVO2-GFP/LacZ

小鼠角膜成纖維細(xì)胞價格硝酸根離子(NO5-)標(biāo)準(zhǔn)溶液1000μg/ml,溶劑:水Protein mixture(原裝)（66-669）高分子量 marker左旋交酯Mouse COL4α1(Collagen Type IV Alpha 1) ELISA Kit

Mouse CORT(Corticosterone) ELISA Kit

硝酸根離子(NO6-)標(biāo)準(zhǔn)溶液100μg/ml,溶劑:水Protein mixture(原裝)(14.4-97.4)低分子量蛋白marker二醇胺月桂酸Mouse C-Peptide(C-Peptide) ELISA Kit

Mouse cPLA2(Phospholipase A2, Cytosolic) ELISA Kit

釹標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/mlCoomassie brilliant blue R-350 考馬斯亮藍(lán)壬基酚聚氧烯醚NP-8.6Mouse Calretinin(Calretinin) ELISA Kit

Mouse Cr(Creatinine) ELISA Kit

釹標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/mL，基體：10%HCl中分子量蛋白marker Protein mixture(原裝) 有機(jī)硅消泡劑Mouse CREB(Cyclic AMP Response Element Binding Protein) ELISA Kit

Mouse CRT(Calreticulin) ELISA Kit

總氮標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/mlCollagenaseⅠ 膠原酶Ⅰ gibco原裝有機(jī)硅消泡劑Mouse CT(Calcitonin) ELISA Kit

Mouse CT-1(Cardiotrophln 1) ELISA Kit

硝酸鹽氮標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/mlCollagenaseⅡ 膠原酶Ⅱ白油Mouse CTACK(Cutaneous T-Cell Attracting Chemokine) ELISA Kit

Mouse CTNNb1(Catenin, Beta 1) ELISA Kit

亞硝酸鹽氮標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/mlCollagenaseⅣ 膠原酶Ⅳ白油Mouse Ctsl(Cathepsin L) ELISA Kit

Mouse CTXI(Cross Linked C-opeptide of Type I Collagen) ELISA Kit

亞硝酸鹽氮標(biāo)準(zhǔn)溶液 100mg/L(以N計)，基體：水N2丹參提取物Mouse CVL/EZR(Cytovillin/Ezrin) ELISA Kit

Mouse CX26(Connexin 26) ELISA Kit

銨氮標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/mlB-27左旋氧氟沙星Mouse CX3CR1(Chemokine C-X3-C-Motif Receptor 1) ELISA Kit

Mouse CX40(Connexin 40) ELISA Kit

一氧化二氮標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/mlDMEM 高糖  Gibco原裝  培養(yǎng)基DMEM高糖，無酚紅、酮酸鈉，500ml虎杖種子Mouse CX43(Connexin 43) ELISA Kit

Mouse CXCL9/MIG(Monokine induced by interferon-gamma) ELISA Kit