參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：百日咳桿菌檢測試劑盒（熒光PCR法）

產(chǎn)品貨號(hào)：YS-P013810

產(chǎn)品規(guī)格：50T

產(chǎn)品分類：PCR檢測試劑盒

產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸

產(chǎn)品保存：-20℃保存

產(chǎn)品有效期：一年

產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。

特點(diǎn)優(yōu)勢：

1.   特異性：所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過TIANDZ及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達(dá)到100%。

2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。

3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。

4.   實(shí)用性：檢測范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個(gè)檢測過程為3-4個(gè)小時(shí)。

5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除TIANDZ公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。

6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐

的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。
實(shí)驗(yàn)過程：

一、試劑準(zhǔn)備

1. DNA模板

2．公司產(chǎn)品僅用于科研對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）

3．10×PCR Buffer

4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM

5．Taq酶

二、操作步驟

1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。

10×PCR buffer             5μl

dNTP mixl                 4μl

引物1（10pM）               2μl

引物2（10PM）              2μl

Taq酶（2U/μl）            1μl

DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl

加ddH2O至               50 μl

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。

3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

使用方法：

一、樣品采集：

1、食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。

2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。

3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。

4、病灶部位樣品：取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。

一、稀釋 PCR 陽性對(duì)照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對(duì)照。

2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液（最好用帶芯槍頭，下同）。

4. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對(duì)照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用

6. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照到 5 號(hào)管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。

7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。放冰上待用。

兔Bcl-2樣蛋白1(BCL2L1/BCL-X)3,4-二二(>98.0%(GC))腎素/血管緊張素形成酶Ren1抗體

兔甘露糖受體C1(MRC1) 3-氧二(>98.0%(GC))分泌性蛋白R(shí)SPO1抗體

兔凝血酶(TM)4-二(>98.0%(GC))RAS的GTP酶激活蛋白抗體

兔膜聯(lián)蛋白A2(ANXA2 )  3-二(>98.0%(GC))G蛋白P21 RAC2抗體

兔激酶錨定蛋白1(AKAP1) 4-氧二(>98.0%(GC))GTP結(jié)合蛋白R(shí)AC1+RAC2抗體

兔血栓前體蛋白(TpP)N--3-聯(lián)(>98.0%(GC))ras癌因家族Rab8蛋白/原癌因c MEL抗體

兔α-內(nèi)肽(α-EP)N--4-聯(lián)(>98.0%(GC))ras癌因家族Rab2抗體

兔谷氧還蛋白3(GLRX3) N,N',N''-三-1,3,5-三(>98.0%(HPLC)(T))ras癌因家族Rab3a抗體

兔免疫球蛋白A (IgA)N-(對(duì))-2-萘(>98.0%(GC))ras癌因家族Rab9蛋白抗體

兔STAT蛋白抑制因子3(PIAS3) N-(對(duì))-1-萘(>96.0%(GC))ras癌因家族RAB20抗體

兔促紅生成素(EPO)2,5-雙(4-氨)-1,3,4-惡二唑(>98.0%(HPLC))Ras樣蛋白A+B抗體

兔脂多糖結(jié)合蛋白(LBP) 2-(2-羥)并惡唑(>98.0%(GC)(T))Rad51抗體

兔狀腺素受體α(THRα) 5,6-二溴-2,1,3-并噻二唑(>98.0%(GC))RNA結(jié)合蛋白片段Y染色體家族蛋白2抗體

兔CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白β(C/EBPβ)2-(2-羥)并噻唑(>98.0%(HPLC)(T))RNA結(jié)合蛋白片段Y染色體家族蛋白1抗體

兔5脂加氧酶(5-LO) 4-氨對(duì)三聯(lián)(>97.0%(GC))RNA聚合酶III抗體

兔蛋白聚糖(PG)2-對(duì)三聯(lián)酸(含有數(shù)量不等的酸酐)磷酸化原癌因c-Met相關(guān)酪氨酸激酶抗體
百日咳桿菌檢測試劑盒（熒光PCR法）IMP3/FITC  熒光素標(biāo)記胰島素樣生長因子ⅡmRNA結(jié)合蛋白3抗體IgG鄰二酚紫 IND

ING1/p33/FITC  熒光素標(biāo)記生長抑制因子因1抗體IgGN-鄰氨酸（釩試劑） AR,95%

Inhibin Alpha/FITC  熒光素標(biāo)記抑制素α抗體IgG1-(2-吡啶偶氮)-2-萘酚 AR,90.0%

Inhibin BetaA/FITC  熒光素標(biāo)記抑制素βA抗體IgG二十五烷 AR,93%

Inhibin Beta B /FITC  熒光素標(biāo)記抑制素βB抗體IgG二十五烷 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99% (GC)

Inhibin Beta C /FITC  熒光素標(biāo)記抑制素βC抗體IgG二十五烷 97%

Inhibin Alpha/Biotin  生物素化抑制素α抗體IgG4-(2-吡啶偶氮)間二酚鈉鹽 97%

Insulin/FITC  熒光素標(biāo)記標(biāo)記胰島素抗體IgG鄰菲羅啉鹽酸鹽 AR，97.0 %