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規(guī)格 | 50次 | 貨號 | YS-P013805 |
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品牌 | YSRIBIO |
服務流程:
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
軍團菌檢測試劑盒(熒光PCR法) | 50T | YS-P013805 |
PCR反應鑒定——PCR反應條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
反應五要素:
參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結(jié)合(復性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。
兔鳥氨酸脫羧酶(ODC)2-吡啶(>98.0%(GC))喹啉酸磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶抗體
兔膽堿磷酸甘油酯(PC/CPG) 4-(2-吡啶)(>95.0%(GC)(T))RNA結(jié)合蛋白QK1抗體
兔Rho家族GTP酶1(RND1)1-異喹啉(>98.0%(GC)(T))維酸誘導蛋白3抗體
兔胰島素樣生長因子1受體(IGF1R)2-[4-(三氟)]吡啶(>98.0%(GC)(T))Rap鳥嘌呤核苷酸交換因子2抗體
兔轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71)7-溴-5-氯-8-羥喹啉(>98.0%(GC)(T))Rap鳥嘌呤核苷酸交換因子(GEF)5抗體
兔肝配蛋白A4 (EFNA4)5-溴-8-羥喹啉(>96.0%(GC))Rho家族GTP酶2抗體
兔三葉因子2(TFF2)5-氯-8-羥喹啉(>98.0%(GC)(T))受體輔助蛋白1抗體
兔單核趨化蛋白1(MCP-1)5,7-二溴-8-羥喹啉(>98.0%(T))環(huán)指蛋白135抗體
兔胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白6(IGFBP-6)5,7-二氯-8-羥喹啉(>98.0%(GC)(T))環(huán)指蛋白146抗體
兔抗狀腺球蛋白抗體(ATGA/TGAB)5,7-二-8-羥喹啉(>98.0%(T))RAS相關(guān)蛋白Rab5B抗體
兔補體片斷5b(C5b) 5-氟-8-羥喹啉(>99.0%(GC)(T))胞膜間內(nèi)質(zhì)網(wǎng)調(diào)節(jié)蛋白1抗體
兔衰變加速因子(DAF) 8-羥-7-喹啉(>98.0%(GC)(T))減數(shù)分裂同源蛋白1抗體
兔BCL2修飾因子(BMF)并[b]噻吩(>97.0%(GC))RAS家族關(guān)聯(lián)結(jié)構(gòu)域蛋白7抗體
兔Bcl2關(guān)聯(lián)永生因3(BAG3)2-溴噻吩(>98.0%(GC))環(huán)指蛋白74抗體(重組激活因1)
兔叉頭框蛋白P3(FOXP3)2-溴-5-氯噻吩(>95.0%(GC))重組激活因2蛋白抗體
兔嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素A(CYPA) 3-溴-2-氯噻吩(>95.0%(GC))受體表達蛋白5/息肉相關(guān)蛋白抗體
軍團菌檢測試劑盒(熒光PCR法)IL-16/FITC 熒光素標記白介素-16抗體IgG孔雀石綠 Biological stain
IL-16/FITC 熒光素標記白介素16抗體IgG孔雀石綠 分析標準品
IL-17/FITC 熒光素FITC標記白介素-17抗體IgG孔雀石綠 95%
IL-17B/FITC 熒光素標記白介素-17B抗體IgG孔雀石綠 AR
IL-17/PE 熒光素PE標記白介素-17抗體IgG紫 AR
IL-17R/IL-17RA/CD217/FITC 熒光素標記白介素17受體抗體IgG皂黃 AR
IL-17(Interleukin-17)human/FITC 熒光素標記白介素-17抗體(人)IgG皂黃 分析標準品,≥98.0% (HPLC)
IL-17RC/IL-17RL/FITC 熒光素標記白介素17受體C抗體IgG3-庚烷 97%
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