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規(guī)格 | 50次 | 貨號 | YS-P013679 |
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品牌 | YSRIBIO |
服務流程:
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結果交付——售后服務。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
禽腺病毒PCR試劑盒 | 50次 | YS-P013679 |
PCR反應鑒定——PCR反應條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術概論。
猴趨化素樣因子超家族成員7(CKLFSF7)蓮心堿(標準品)麻疹病融合蛋白抗體
猴載脂蛋白H(ApoH) 5-O-維斯阿米苷(標準品)紅膜蛋白55抗體
猴促胰液素(SCT)N-野靛堿(標準品)膜相關環(huán)指蛋白5抗體
猴血管內(nèi)皮生長因子B(VEGF-B)9-氧喜樹堿(標準品)磷酸化肌增強因子2C抗體
猴葡萄糖轉運蛋白3(GLUT3) 10-姜酚(標準品)線粒體核糖體蛋白MRP63抗體
猴激肽釋放酶6(KLK6) 6-姜酚(標準品)磷酸化肌增強因子2C抗體
猴白彈性蛋白酶(HLE) 8-姜酚(標準品)質(zhì)金屬蛋白酶13抗體
猴磷酸化外信號調(diào)節(jié)激酶(pERK)姜酮(標準品)酪氨酸單氧化酶微管相關蛋白MICAL抗體
猴蛋白C抑制劑(PCI)姜酮(標準品)梅克爾-格魯伯綜合征相關蛋白抗體
猴內(nèi)肽2(EM2) 6-姜烯酚(標準品)突變的黑色素瘤相關抗原1抗體
猴小核糖核蛋白多肽C(SNRPC)絞股藍皂苷XLIX(標準品)黑色素瘤相關抗原10抗體
猴黑色素瘤關聯(lián)ME20 (ME20M)YM-201636絲裂原活化蛋白激酶激酶2抗體
猴肌酸激酶同工酶MB(CKMB) 金石蠶苷(標準品)G蛋白偶聯(lián)受體24抗體
猴低密度脂蛋白受體(VLDLR)金絲桃苷(標準品)絲裂原活化蛋白激酶組織蛋白1抗體
猴CC趨化因子受體1(CCR1) 京尼平(標準品)同源盒蛋白Meis1抗體
猴血管內(nèi)皮生長因子(VEGF) 阿非迪霉素;艾菲地可寧單氨氧化酶A抗體
禽腺病毒PCR試劑盒CD133 gen/FITC 熒光素標記造血干抗原CD133抗體IgG2,6-二酸 98%
OX40/CD134/TNFRSF4/FITC 熒光素標記CD134抗體IgG3-氧羰酸 97%
IL-7Ra/CD127/PE 熒光素PE標記兔抗人、大、小鼠、馬、兔白介素-7受體a抗體IgG4-氧羰酸 97%
CD137/TNFRSF9/FITC 熒光素標記CD137抗體IgG3-氧酸 98%
CD133 antigen/PE 熒光素藻紅蛋白標記兔抗人、大、小鼠和果蠅CD133抗體IgG2-酸 98%
HVEM/TNFRSF14/FITC 熒光素標記腫瘤壞死因子受體超家族成員14抗體IgG3-氧羰酸頻哪酯 97%
Syndecan-1/CD138/FITC 熒光素標記多配體聚糖抗體IgG4-(硫代)酸 98%
CD141/FITC 熒光素標記凝血調(diào)節(jié)蛋白抗體IgG酸 98%
反應五要素:
參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
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