參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：馬鼻肺炎病毒探針法熒光定量PCR試劑盒
產(chǎn)品貨號：YS-P013677

產(chǎn)品規(guī)格：50次

產(chǎn)品分類：PCR檢測試劑盒

產(chǎn)品運輸：低溫運輸

產(chǎn)品保存：-20℃保存

產(chǎn)品有效期：一年

產(chǎn)品特點：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。

實驗過程：

一、試劑準(zhǔn)備

1. DNA模板

2．公司產(chǎn)品僅用于科研對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）

3．10×PCR Buffer

4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM

5．Taq酶

二、操作步驟

1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。

10×PCR buffer             5μl

dNTP mixl                 4μl

引物1（10pM）               2μl

引物2（10PM）              2μl

Taq酶（2U/μl）            1μl

DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl

加ddH2O至               50 μl

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。

3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

特點優(yōu)勢：

1.   特異性：所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過TIANDZ及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。

2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。

3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。

4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。

5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除TIANDZ公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。

6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。

猴二氫硫辛酸脫氫酶(DLD)胡蘿卜苷(標(biāo)準(zhǔn)品)肌肉特異性環(huán)指蛋白3抗體

猴氧化低密度脂蛋白(OxLDL)β-胡蘿卜素（標(biāo)準(zhǔn)品）磷酸化原癌因c-Met相關(guān)酪氨酸激酶抗體

猴異常凝血酶原(APT)  胡麻屬苷（標(biāo)準(zhǔn)品）絲裂原活化蛋白激酶13抗體

猴中心體蛋白110(CEP110)葫蘆巴堿鹽酸鹽（標(biāo)準(zhǔn)品）多纖毛素蛋白抗體

猴鐵調(diào)素(Hepc)葫蘆素B(標(biāo)準(zhǔn)品)肌管素相關(guān)蛋白8抗體

猴α-血紅蛋白穩(wěn)定蛋白(αHSP)  槲皮苷(標(biāo)準(zhǔn)品）巨噬甘露糖受體2抗體

猴胰島素降解酶(IDE)槲皮素-7-O-葡萄糖苷(標(biāo)準(zhǔn)品)周期G1的相互作用蛋白抗體

猴TATA框結(jié)合蛋白/TBP相關(guān)因子(TAF)花椒酚（標(biāo)準(zhǔn)品）主導(dǎo)控制樣蛋白3抗體

猴谷氨酸半胱氨酸連接酶修飾亞(GCLM)槐果堿（標(biāo)準(zhǔn)品）絲裂原活化蛋白激酶MKK3抗體

猴血紅蛋白β(HBβ) 環(huán)氧澤瀉烯(標(biāo)準(zhǔn)品)MYSM1抗體

猴抗糖脂抗體(AGA) 黃柏堿（標(biāo)準(zhǔn)品）單羧酸轉(zhuǎn)運蛋白-1抗體

猴蕈堿型膽堿受體M2(CHRM2)黃柏酮（標(biāo)準(zhǔn)品）微管相關(guān)蛋白1A抗體

猴質(zhì)金屬蛋白酶原10 (Pro-MMP-10)黃豆黃苷（標(biāo)準(zhǔn)品）中期因子/肝素結(jié)合生長因子抗體

猴β肌動蛋白(β-actin) 黃豆黃素（標(biāo)準(zhǔn)品）鹽皮質(zhì)激素受體抗體

猴生長分化因子3(GDF3)黃獨素B(標(biāo)準(zhǔn)品)促黑激素α抗體

猴蛋白聚糖(PG)黃連堿（標(biāo)準(zhǔn)品）Myc因相關(guān)X因子抗體
馬鼻肺炎病毒探針法熒光定量PCR試劑盒CD79A/IGBP-1 /FITC  熒光素標(biāo)記免疫球蛋白結(jié)合蛋白-1抗體IgG2,4-二氧酸  96%

B7-1/CD80 /FITC  熒光素標(biāo)記抗激分子B7-1蛋白抗體IgG4-(二氨酰)酸 97%

CD80/B7-1/FITC  熒光素標(biāo)記激分子B7-1蛋白抗體IgG4-(二氨)酸 95%

CD82/KAI1/FITC  熒光素標(biāo)記腫瘤轉(zhuǎn)移抑制蛋白1抗體IgGN,N-二-4-(4,4,5,5-四-1,3,2-二氧雜戊烷-2-) 98

CD83/Cell surface protein HB15/FITC  熒光素標(biāo)記CD83抗體IgG4-(二)酸 98%

CD84/SLAMF5/FITC  熒光素標(biāo)記CD84抗體IgG2,4-二酸 97%

SLAMF6/LY108/FITC  熒光素標(biāo)記SLAMF6抗體IgG3,4-二酸 98%

CD86/B7-2 /FITC  熒光素標(biāo)記CD86抗體IgG3,5-二氧酸 98%
使用方法：

一、樣品采集：

1、食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗要求進行。

2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。

3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。

4、病灶部位樣品：取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。

一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。

2. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液（最好用帶芯槍頭，下同）。

4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用

6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。