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當前位置:上海研生實業(yè)有限公司>>PCR類>>熒光定量PCR試劑盒>> 50次小鼠微小病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

小鼠微小病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

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產(chǎn)品型號50次

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

更新時間:2021-11-20 17:03:07瀏覽次數(shù):141次

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規(guī)格 50次 貨號 YS-P013673
品牌 YSRIBIO
小鼠微小病毒探針法熒光定量PCR試劑盒原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增,擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。

服務流程:

公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結果交付——售后服務。

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貨號

小鼠微小病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

50次

YS-P013673

PCR反應鑒定——PCR反應條件:

循環(huán)步驟

溫度

時間

循環(huán)數(shù)

預變性

94℃

5   min

1

變性

94℃

10   sec

30-40

退火

50-65℃

20   sec

30-40

延伸

72℃

30   sec/kb

30-40

終延伸

72℃

5   min

1

組成及試劑配制:

1、酶標板:一塊(96孔)

2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。

3、 樣品稀釋液:1×20ml。

4、 檢測稀釋液A:1×10ml。

5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
QQ截圖20191211135002.jpg

PCR反應的特異性決定因素為:

①引物與模板DNA特異正確的結合;

②堿基配對原則;

③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;

④靶基因的特異性與保守性。

其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高

PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。

(3) 簡便、快速

PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。

(4) 對標本的純度要求低

不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術概論。

猴胱天蛋白酶激活的脫氧核糖核酸酶(CAD) 莪術二酮(標準品)絲裂原活化蛋白激酶6抗體

猴血管緊張素II受體2抗體(ANGⅡR2-Ab)  蒽醌(標準品)磷酸化絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶MST4,MST3,STK25抗體

猴表皮調(diào)節(jié)素(EREG)蒽醌表皮生長因子樣蛋白Megf10抗體

猴質(zhì)裂解蛋白/質(zhì)溶素(MAT)1,3-二咖啡??鼘幩?標準品)MPP4蛋白抗體

猴組織因子途徑抑制因子(TFPI)洋薊素;1,5-二咖啡酰奎寧酸(標準品)微小染色體維持缺陷蛋白7抗體

猴蛋白C(PROC)二氫丹參酮I(標準品)E3泛素連接酶MUL1抗體

B連接蛋白(BLNK)  二氫歐山芹當歸酸酯(標準品)纖微絲相關糖蛋白2抗體

猴三肽肽酶I(TPP1)二氫楊梅素肥大類糜蛋白酶1抗體

猴嗜鉻蛋白A/胰抑制素(CgA/Pancreastatin)  二氫楊梅素(標準品)硝唑單克隆抗體

猴白介素18(IL-18)番瀉苷A(標準品)線粒體核糖體蛋白L12抗體

猴葡萄糖6磷酸異構酶(GPI)  番瀉苷B(標準品)線粒體核糖體蛋白L39

猴顆粒酶B(GzmB) 防己諾林堿(標準品)酮酸脫氫酶激酶1抗體

猴巨噬移動抑制因子(MIF)粉防己堿;漢防己素(標準品)絲裂原活化的蛋白激酶p38β抗體

猴重組激活因2(RAG-2) 佛手柑內(nèi)酯核質(zhì)蛋白3抗體

猴狀腺原氨酸甘草次酸(α型),18alpha-甘草次酸(標準品)組織相容性復合體蛋白1抗體

猴磷脂酶A2激活蛋白(PLAA)甘草苷(標準品)組織相容性復合體蛋白2抗體
小鼠微小病毒探針法熒光定量PCR試劑盒CD43/SPN/FITC  熒光素標記CD43抗體IgG5-溴-2-氯酸 98%

CD44/RBITC  紅色熒光素羅丹明標記CD44抗體IgG9-(4-溴)咔唑 98%

CD44v4 /FITC   熒光素標記兔抗人、大、小鼠CD44V4抗體IgG2-溴蒽 97%

CD44v5 /FITC   熒光素標記兔抗人、大、小鼠CD44V5抗體IgG9-溴蒽 96%

CD44V6/CD44/HCAM/FITC  熒光素標記抗CD44抗體IgG9-溴菲 98%

CD44v7 /FITC   熒光素標記兔抗人、大、小鼠CD44V7抗體IgG3-氯-4-氟酸 98%

CD45(LCA)/FITC  熒光素標記CD45(白共同抗原)抗體4-羧酸 97%

CD45/RBITC  紅色熒光素羅丹明標記CD45抗體 IgG2-氯-4-氟酸 98%
反應五要素:

參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:

①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。

②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。

③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。

⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。

引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。


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