當前位置:上海研生實業(yè)有限公司>>PCR類>>熒光定量PCR試劑盒>> 50次黃頭病毒RT-PCR試劑盒
規(guī)格 | 50次 | 貨號 | YS-P013573 |
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品牌 | YSRIBIO |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
服務(wù)流程:
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
黃頭病毒RT-PCR試劑盒 | 50次 | YS-P013573 |
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學(xué)中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
豬核孔蛋白153kda(NUP153)萘酚AS-D-酸酯磷酸化HER2受體抗體
豬線粒體超氧化物歧化酶2(SOD2)硫酸氯酯組蛋白去?;?抗體
豬色素P450家族成員26A1(CYP26A1) 鋅原卟啉磷酸化組蛋白去酰化酶6抗體
豬生長因子受體結(jié)合蛋白2(Grb2)美伐他汀,康百汀組蛋白去?;?抗體
豬脂聯(lián)素受體2(ADIPOR2) 美伐他汀(標準品)磷酸化組蛋白去?;?抗體
豬血紅素氧化酶1(HO1) 6-氨青霉烷酸組蛋白去酰化酶8抗體
豬磷脂酰絲氨酸(PS)L-天門冬酰酶,門冬酰酶磷酸化HER4抗體
豬激肽釋放酶7(KLK7) 2,2'-聯(lián)喹啉-4,4'-二酸二鈉(BCA)組氨酸t(yī)RNA連接酶抗體
豬分泌粒蛋白II (SCG2)魏因勒卜鏈接劑,N-芴氧羰-N-氧-3-氨酸雞新城疫血凝素-神經(jīng)氨酸酶抗體
豬維酸受體α(RARα)N-Fmoc-D-1,2,3,4-四氫異喹啉-3-羧酸熱休克蛋白105抗體
豬抗心磷脂抗體IgM(ACA-IgM) N-芐氧羰-L-氨酸肝核因子1α抗體
豬γ谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-ECS)N-芐氧羰-L-谷氨酰缺氧誘導(dǎo)因子1β /HIF-1β抗體
豬平足蛋白(PDPN)N-CBZ-L-氨酸熱休克轉(zhuǎn)錄因子2抗體
豬金屬硫蛋白1E (MT1E)鹽酸美卡因HA tag標簽抗體
豬糖皮質(zhì)激素受體β(GRβ) N-芐氧羰-L-絲氨酸缺氧誘導(dǎo)因1蛋白抗體
豬C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族2成員C(CLEC2C) N-芐氧羰-L-蘇氨酸人絨毛膜促性腺激素α 亞單抗
黃頭病毒RT-PCR試劑盒TGF-beta 2 轉(zhuǎn)移生長因子β2抗體二氟溴酸酯 97%
TGF beta 3 轉(zhuǎn)移生長因子β3抗體氫加蘭他敏 98%
TGF Beta R1/TGFBR1 轉(zhuǎn)移生長因子β受體1抗體二氫黃酮甙 97%
TGF beta R2/TGFBR2 轉(zhuǎn)移生長因子β受體2抗體半胱鹽酸鹽 98%
TGF Beta R3 轉(zhuǎn)移生長因子β受體3抗體鹽酸二氟沙星 分析標準品
TGM3 轉(zhuǎn)谷氨酰酶3抗體Α-D-五酸酰吡喃葡萄糖 98%
Thioster-containing protein 1 按蚊硫酯包含蛋白-1抗體4--2-酰氨-2-脫氧-β-D-吡喃葡萄糖苷 99%
ERdj5 ERdj5蛋白抗體對-β-D-吡喃半乳糖苷 99%
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