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規(guī)格 | 50次 | 貨號 | YS-P013316 |
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品牌 | YSRIBIO |
服務(wù)流程:
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
小鼠線粒體DNA通用PCR試劑盒 | 50次 | YS-P013316 |
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。
人生長分化因子2(GDF2)斑蝥素1號染色體開放閱讀框38抗體
人生長分化因子3(GDF3)斑蝥素(標準品)脫羧酶蛋白體36抗體
人生長分化因子5(GDF5)維羅非尼,RG7204間隙連接蛋白40抗體
人生長分化因子6(GDF6)白花前胡素E間隙連接蛋白43抗體
人生長分化因子7(GDF7)白花前胡甲素(標準品)間隙連接蛋白45抗體
人生長分化因子9(GDF9)去甲斑蝥素表面趨化因子受體1抗體
人己糖激酶2(HK2)去甲斑蝥素(標準品)色素P450單氧化酶抗體
人生長激素2(GH2)反式玉米素色素C抗體
人生長激素結(jié)合蛋白(GHR/P)氯亞鉑酸 角蛋白1抗體
人氧固結(jié)合蛋白樣蛋白1A(OSBPL1A)環(huán)黃芪巨病PP65/CMV低基質(zhì)磷脂蛋白抗體
人饑餓素(GHRL) 馬兜鈴酸A周期素C抗體
人精氨酸酶(ARG2) 羥基茜草素/紅紫素(標準品)周期素B1抗體
人生長激素誘導跨膜蛋白(GHITM)酸棗仁皂苷D(標準品)球蛋白抗體
人生長相關(guān)蛋白43(GAP43) 偽原薯蕷皂苷周期素D1抗體
人生長抑素(SST)氧化芍藥苷,羥基芍藥苷(標準品)周期素D2抗體
人生長抑素受體1(SSTR1)3-異倒捻子素周期素E抗體
小鼠線粒體DNA通用PCR試劑盒Cyclin C 周期素C抗體苯甲酸芐酯 ≥99%, FCC
Cyclin D1 周期素D1抗體乙酸芐酯 99%
Phospho-Cyclin D1 (Thr286) 磷酸化cyclin D1抗體乙酸芐酯 ≥99%, FCC, FG
Cyclin D2 周期素D2抗體乙酸芐酯 分析標準品,≥99.7% (GC
Cyclin D3 周期素D3抗體甲酸丁酯 95%
Cyclin E 周期素E抗體甲酸丁酯 Standard for GC
phospho-Cyclin E(Thr395) 磷酸化周期素E抗體仲丁 99%
phospho-Cyclin E(Thr62) 磷酸化周期素E抗體乳酸丁酯 98%
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