參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：鼠疫桿菌檢測試劑盒（熒光PCR法）

產(chǎn)品貨號：YS-P013959

產(chǎn)品規(guī)格：50T

產(chǎn)品分類：PCR檢測試劑盒

產(chǎn)品運輸：低溫運輸

產(chǎn)品保存：-20℃保存

產(chǎn)品有效期：一年

產(chǎn)品特點：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。

特點優(yōu)勢：

1.   特異性：所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過TIANDZ及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。

2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。

3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。

4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。

5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除TIANDZ公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。

6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐

的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。
實驗過程：

一、試劑準備

1. DNA模板

2．公司產(chǎn)品僅用于科研對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）

3．10×PCR Buffer

4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM

5．Taq酶

二、操作步驟

1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。

10×PCR buffer             5μl

dNTP mixl                 4μl

引物1（10pM）               2μl

引物2（10PM）              2μl

Taq酶（2U/μl）            1μl

DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl

加ddH2O至               50 μl

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。

3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

使用方法：

一、樣品采集：

1、食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗要求進行。

2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。

3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。

4、病灶部位樣品：取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。

一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。

2. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液（最好用帶芯槍頭，下同）。

4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用

6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

雞趨化因子CX3C受體1(CX3XR1)雷米普利拉-d5Alexa Fluor 555標記的兔抗犬IgM抗體

雞6-羥多巴(6-OHDA)  雷米普利-d3 Alexa Fluor 647標記的兔抗犬IgM抗體

雞Rho GDP解離抑制因子α(ARHGDIα)雷米普利二酮哌辣根過氧化物酶標記的兔抗犬IgM抗體

雞肌肉生長抑制素(MSTN)雷米普利拉生物素標記的兔抗犬IgM抗體

雞維生素D結(jié)合蛋白(DBP)4-羥噻膠體金標記的兔抗犬IgM抗體

雞降鈣素因相關(guān)肽(CGRP) 4,7,8,9-四-O-酰-2-硫代-N-酰-a-D-神經(jīng)氨酸酯羅丹明標記的兔抗犬IgM抗體

雞狀腺球蛋白(TG)N-羥酰神經(jīng)氨酸堿性磷酸酶（AP）標記的兔抗犬IgM抗體

雞踝蛋白(TLN)N,N-二去鹽酸曲美布汀-d5FITC標記的兔抗犬IgM抗體

雞血管緊張素I(ANG I) N,N-二去鹽酸曲美布汀Cy3標記的兔抗犬IgM抗體

雞層粘蛋白(LN)N-去鹽酸曲美布汀Cy5標記的兔抗犬IgM抗體

雞信號素4C (SEMA4C) 5-羥-2-酸吡Cy5.5標記的兔抗犬IgM抗體

雞肺耐藥蛋白(LRP)3-氨-2-酸吡Cy7標記的兔抗犬IgM抗體

雞血小板衍生生長因子受體α(PDGFRα)柚皮素-4'-O-β-D-葡萄糖苷酸PE標記的兔抗犬IgM抗體

雞末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶(TDT) (±)-柚皮素PE-Cy3標記的兔抗犬IgM抗體

雞蛋白激酶Bγ(PKBG)3-羥環(huán)扎林PE-CY5標記的兔抗犬IgM抗體

雞碳酸酐酶VB(CA5B)環(huán)扎林 N-β-D-葡萄糖苷酸APC標記的兔抗犬IgM抗體
鼠疫桿菌檢測試劑盒（熒光PCR法）CD72/Ly-32/FITC  熒光素標記CD72抗體IgG黑化誘導(dǎo)神經(jīng)肽 ≥97% (HPLC)

CD74(MHC II )/FITC  熒光素標記CD74抗體IgG人、大鼠 促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子 ≥95% (HPLC)

TGF- Alpha /FITC  熒光素標記轉(zhuǎn)移生長因子–α抗體IgG2-(2-吡啶酮-1-)-1,1,3,3-四脲四氟酸鹽  99%

TGF- Beta1/FITC  熒光素標記TGF-β1抗體IgG(標記抗體)N,N'-二(芐氧羰)-L-胱氨酸 98%

TGF- Beta2 /FITC  熒光素標記轉(zhuǎn)移生長因子–β2抗體IgG二碳酸二叔丁酯 98%

TGF- Beta3/FITC  熒光素標記轉(zhuǎn)移生長因子–β3抗體IgG二碳酸二叔丁酯 99%

TGF- BetaR1/ALK /FITC  熒光素標記轉(zhuǎn)移生長因子–β受體1抗體IgG二碳酸二叔丁酯 96%

TGF- BetaR 2/FITC  熒光素標記轉(zhuǎn)移生長因子–β受體2抗體IgGN,N'-二異碳二酰亞 98%