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當(dāng)前位置:上海研生實(shí)業(yè)有限公司>>PCR類>>熒光定量PCR試劑盒>> 50次柯薩奇病毒A4型檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法)
規(guī)格 | 50次 | 貨號(hào) | YS-P013849 |
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品牌 | YSRIBIO |
服務(wù)流程:
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
柯薩奇病毒A4型檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法) | 50T | YS-P013849 |
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測(cè)中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡(jiǎn)便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無(wú)放射性污染、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
兔白介素13(IL-13)4,4'-聯(lián)二硫(>98.0%(HPLC))分選連接蛋白2抗體
兔內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶1(ECE1)4,4'-聯(lián)二(>98.0%(GC))分選連接蛋白7抗體
兔八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子2(OBTF2)4,4'-聯(lián)二(>97.0%(GC))核轉(zhuǎn)錄因子抗體
兔血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)3,3'-二氨聯(lián)(>98.0%(HPLC))轉(zhuǎn)錄因子SOX7抗體
兔伴刀豆球蛋白A(ConA) 4,4'-二硝聯(lián)(>99.0%(HPLC))卵子結(jié)合生成堿性螺旋蛋白抗體
兔酰膽堿酯酶關(guān)聯(lián)蛋白(ACHAP) 2,2'-聯(lián)二酸(>98.0%(GC)(T))卵子結(jié)合生成堿性螺旋蛋白2抗體
兔巨噬炎性蛋白1β(MIP-1β) 八氟-4,4'-聯(lián)酚(>95.0%(GC))發(fā)育多能性相關(guān)蛋白3抗體
兔血小板衍生生長(zhǎng)因子亞B(PDGFB)4,4'-二氨八氟聯(lián)(>97.0%(GC))核蛋白相互作用蛋白1抗體
兔磷脂酶B(PLB)2,2'-二聯(lián)(>95.0%(GC))FHOD3蛋白抗體
兔磷脂酶D2(PLD2)2,2'-二硝聯(lián)(>99.0%(GC))肝生長(zhǎng)因子激活抑制蛋白2抗體
兔磷酸化外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(pERK)4,4'-二酰聯(lián)(>99.0%(GC))分泌和跨膜蛋白1抗體
兔免疫球蛋白G Fc段低親和力受體IIIb(FcγR3B) 4,4'-二異酸-3,3'-二聯(lián)(>98.0%(GC))相關(guān)抗原6抗體
兔肌球蛋白輕鏈激酶(MLCK/MYLK)3,3'-二氟聯(lián)(>96.0%(GC))剪接體相關(guān)蛋白155抗體
兔生長(zhǎng)分化因子10(GDF10)4,4'-二氟聯(lián)(>98.0%(GC))短鏈L-3羥烷輔酶A脫氫酶抗體
兔相關(guān)漿蛋白A(PAPPA)4,4'-二酰氧聯(lián)(>99.0%(GC))監(jiān)理蛋白抗體
兔免疫球蛋白A2 (IgA2)3,3'-二羥聯(lián)(>99.0%(T))運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元生存蛋白1
柯薩奇病毒A4型檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法)MEK6/FITC 熒光素標(biāo)記絲裂原活化蛋白激酶MKK6抗體IgG固黑K鹽 80%
MKK3/FITC 熒光素標(biāo)記抗絲裂原活化蛋白激酶MKK3/6抗體IgG固深紅 GBC 90%
Phospho-MKK3 (Ser189)/MKK6 (Ser207) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化絲裂原活化蛋白激酶MKK3/6抗體IgG固紅 KL鹽 Biological stain,含量90%
Phospho-MEK6 (Ser207)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化絲裂原活化蛋白激酶MKK6抗體IgG固紅RC 生化試劑級(jí)
Phospho-MEK6 (Ser202)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化絲裂原活化蛋白激酶MKK6抗體IgG固紅 RL Biological stain
Phospho-MKK7 (Ser271/Thr275) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化絲裂原活化蛋白激酶MKK7抗體IgG固紅B 90%
MKP-1/DUSP1/FITC 熒光素標(biāo)記絲裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1抗體IgG固紅TR半氯化鋅鹽 90%
Phospho-MKP1 (Ser359)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化絲裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1抗體IgG固紅-萘磺酸 TR 95%
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