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規(guī)格 | 50次 | 貨號 | YS-P013665 |
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品牌 | YSRIBIO |
服務(wù)流程:
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
木霉屬通用染料法熒光定量PCR試劑盒 | 50次 | YS-P013665 |
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
猴白活化黏附因子(ALCAM) 1,8-桉葉素卵磷酯膽固酰轉(zhuǎn)移酶抗體
猴骨成型蛋白受體II(BMPR2) CAPS; 3-(環(huán)已)磺酸脂蛋白脂酶抗體
猴肌鈣蛋白C2 (TNNC2)巴豆苷(標(biāo)準(zhǔn)品)瘦素受體抗體
猴促狀腺素(TSH)巴西蘇木素(標(biāo)準(zhǔn)品)低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白6抗體
猴酰膽堿受體抗體(AChRab) 菝葜皂苷元(標(biāo)準(zhǔn)品)磷酸化低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白6抗體
猴成纖維生長因子9(FGF9)白當(dāng)歸腦(標(biāo)準(zhǔn)品)磷酸化腫瘤抑制因LATS1抗體
猴組織多肽特異性抗原(TPS) 白當(dāng)歸素(標(biāo)準(zhǔn)品)富亮氨酸重復(fù)激酶2抗體
猴免疫球蛋白G1(IgG1)白果內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品)肺耐藥相關(guān)蛋白抗體
猴酮酸脫氫酶α(PDHα)白花前胡(標(biāo)準(zhǔn)品)富含亮氨酸重復(fù)家庭蛋白3抗體
猴抗酰膽堿受體抗體(Anti-AChR)環(huán)杷明;環(huán)巴;去氧芥芬(標(biāo)準(zhǔn)品)富含亮氨酸重復(fù)蛋白10抗體
猴Rho GDP解離抑制因子α(ARHGDIα)白樺脂富含亮氨酸重復(fù)家庭蛋白2抗體
猴周期素依賴性激酶6(CDK6) 白樺脂(標(biāo)準(zhǔn)品)富含亮氨酸重復(fù)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白抗體
猴肝臟膠原凝集素1(CLL1) 白樺脂(標(biāo)準(zhǔn)品)層粘連蛋白受體1抗體(C端)
猴堿性成纖維生長因子(bFGF/FGF2)白樺脂酸(標(biāo)準(zhǔn)品)層粘連蛋白受體1抗體(N端)
猴α平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA) 白樺脂酸磷酸化淋巴增強(qiáng)因子-1抗體
猴谷胱甘肽還原酶(GR)白蠟樹素(標(biāo)準(zhǔn)品)層粘連相關(guān)多肽蛋白1抗體
木霉屬通用染料法熒光定量PCR試劑盒CCR-3/FITC 熒光素標(biāo)記CC趨化因子受體3抗體IgGD-色氨酸 98%
CCR-4/FITC 熒光素標(biāo)記CC趨化因子受體4抗體IgGL-狀腺素 98%
CCR-5/FITC 熒光素標(biāo)記表面趨化因子受體5抗體IgGL-色氨酸酯鹽酸鹽 98%
CCR6/CD196/FITC 熒光素標(biāo)記趨化因子受體6抗體IgGL-狀腺素鈉 98%
CCR-7/FITC 熒光素標(biāo)記CC趨化因子受體7抗體IgGD-纈氨酸 98%
CCR-8 /FITC 熒光素標(biāo)記表面趨化因子受體8抗體IgGDL-纈氨酸 98%
CCR-9/FITC 熒光素標(biāo)記表面趨化因子受體9抗體IgGL-纈氨酸酯鹽酸鹽 99%
CCR-10/FITC 熒光素標(biāo)記表面趨化因子受體10抗體IgGL-纈氨 97%
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