當(dāng)前位置:上海研生實(shí)業(yè)有限公司>>PCR類>>熒光定量PCR試劑盒>> 50次近平滑念珠菌染料法熒光定量PCR試劑盒
規(guī)格 | 50次 | 貨號 | YS-P013611 |
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品牌 | YSRIBIO |
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
服務(wù)流程:
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
近平滑念珠菌染料法熒光定量PCR試劑盒 | 50次 | YS-P013611 |
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。
豬嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素A(CYPA) 連翹酯苷E(標(biāo)準(zhǔn)品)鋅指蛋白IKAROS抗體
豬復(fù)制蛋白A(RPA-70) 羅通定/左旋延胡索素/左旋四氫巴馬汀(標(biāo)準(zhǔn)品)免疫球蛋白j鏈抗體
豬成纖維生長因子受體1(FGFR1) 表沒食子兒茶素沒食子酸酯(標(biāo)準(zhǔn)品)5-三磷酸肌受體1抗體
豬胃脂酶 (LIPF)去氧膽酸(標(biāo)準(zhǔn)品)5-三磷酸肌受體2抗體
豬粘蛋白6(MUC6)鈣黃綠素酰酯DNA結(jié)合抑制因子3抗體
豬間隙連接蛋白31(CX31) 煙酰(標(biāo)準(zhǔn)品)誘導(dǎo)協(xié)同激分子配體CD275抗體
豬D-多巴色素變位酶(DDT) 丁東莨菪堿(標(biāo)準(zhǔn)品)免疫球蛋白超家族成員12抗體
豬胃泌素釋放肽前體(ProGRP)雪膽素(標(biāo)準(zhǔn)品)草酰琥珀酸脫羧酶α抗體
豬蛋白酶3抗體(PR3Ab)5-羥色酸(標(biāo)準(zhǔn)品)干擾素alpha 5蛋白抗體
豬淋巴趨化因子(Lptn/XCL1)5-羥色酸(5-HTP)胰島素樣生長因子1抗體
豬αL巖藻糖苷酶(FUCA) 滅草煙,咪唑煙酸KB抑制蛋白激酶β抗體
豬胎蛋白(αFP) 咪唑煙酸(標(biāo)準(zhǔn)品)囊包蛋白/內(nèi)披蛋白抗體
豬補(bǔ)體因子D(CFD) 石膽酸(標(biāo)準(zhǔn)品)胰島素受體相關(guān)受體抗體
豬神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白4(NRG-4)氧酸INCA1蛋白抗體
豬腺苷酸環(huán)化酶2(ADCY2) 氧酸(標(biāo)準(zhǔn)品)IQCE蛋白抗體
豬肟前列腺素D2(PGD2-MOX)異丁司特雞傳染性法氏囊病病抗體
近平滑念珠菌染料法熒光定量PCR試劑盒AARS2 /FITC 熒光素標(biāo)記氨酰tRNA合成酶2抗體IgG1,3-二咪唑鎓二磷酸酯 98.0%
AAT/FITC 熒光素標(biāo)記α-1抗胰蛋白酶抗體IgG1--3-咪唑溴鹽 98%
AATF/FITC 熒光素標(biāo)記拮抗凋亡轉(zhuǎn)錄因子抗體IgG1--3-咪唑六氟磷酸鹽 98%
AATK/FITC 熒光素標(biāo)記凋亡關(guān)聯(lián)酪氨酸激酶抗體IgG1--3-咪唑雙三氟磺酰亞鹽 97%
BTK/ATK /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠蛋白酪氨酸激酶ATK抗體IgG1--3-咪唑三氟磺酸鹽 98%
Phospho-Btk(Tyr223) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠蛋白酪氨酸激酶ATK抗體IgG1--3-咪唑鎓四氟酸鹽 97%
Phospho-Btk(Ser180) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠蛋白酪氨酸激酶ATK抗體IgG1--3-氯化咪唑鎓[用于熔鹽] 98.0%
ABCA1/FITC 熒光素標(biāo)記腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1抗體IgG1--3-咪唑硫酸酯 99%
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