當(dāng)前位置:上海研生實業(yè)有限公司>>PCR類>>熒光定量PCR試劑盒>> 50次賈第蟲檢測試劑盒(熒光PCR法)
規(guī)格 | 50次 | 貨號 | YS-P013947 |
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品牌 | YSRIBIO |
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
服務(wù)流程:
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
賈第蟲檢測試劑盒(熒光PCR法) | 50T | YS-P013947 |
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
雞G蛋白偶聯(lián)雌激素受體1(GPER1)N-油酰-D-赤-鞘氨突觸結(jié)合蛋白12抗體
雞血小板衍生生長因子D(FDGFD)D-赤-鞘氨C-20大腸桿菌志賀樣素Ⅱ型突變體(O139菌型)抗體
雞脂聯(lián)素(ADP/Acrp30)L-蘇型-鞘氨C-18泛素連接酶Siah1抗體
雞甘肽/甘素(GAL) C16 神經(jīng)酰(N-十六烷酰鞘氨,D-赤)磷酸化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子Smad-1抗體
雞N-酰半乳糖-6-硫酸酯酶(GAS)L-赤-鞘氨(合成物)磷酸化5-脂氧合酶抗體
雞肌酸激酶同工酶MB(CKMB) 疊氮-赤-鞘氨磷酸化5-脂氧合酶抗體
雞粘膜相關(guān)上皮趨化因子(MEC/CCL28) DL-赤-二氫鞘氨應(yīng)激誘導(dǎo)分泌蛋白1抗體
雞抗糖脂抗體(AGA) (2S,3R,4E)-2-疊氮-3-(叔丁二硅烷)-赤-鞘氨抗腫瘤蛋白ANUP抗體
雞信號傳導(dǎo)轉(zhuǎn)錄激活因子6B(STAT56B)3-O-(叔丁二硅烷氧)-赤-鞘氨小谷氨酰三角四肽重復(fù)區(qū)蛋白α抗體
雞觸珠蛋白相關(guān)蛋白(HPR) D-赤-二氫-D-鞘氨-1-磷酸鹽SUGT1蛋白抗體
雞骨形態(tài)形成蛋白拮抗蛋白1(GREM1)(2S,3R,4E)-2-疊氮-3-(叔丁二硅烷)-1-酰赤-鞘氨紡錘體和著絲粒相關(guān)蛋白3抗體
雞伴侶蛋白10(CPN10) 3-O-(叔丁二硅烷氧)-2-Fmoc-赤-鞘氨紡錘體和著絲粒相關(guān)蛋白2抗體
雞抗麥膠蛋白/麥溶蛋白抗體(AGA) 籠形D-赤-鞘氨-1-磷酸鹽轉(zhuǎn)錄因子蛋白SIM1抗體
雞白活化黏附因子(ALCAM) N-氨哌啶-D-赤-鞘氨-2,3-N,O-縮酮核轉(zhuǎn)錄因子SOX14抗體
雞質(zhì)裂解蛋白/質(zhì)溶素(MAT)2-疊氮-1-酰-D-赤-鞘氨信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子1抗體
雞脾臟酪氨酸激酶(SYK) N-氨哌啶-赤-鞘氨核轉(zhuǎn)錄因子SOX6抗體
賈第蟲檢測試劑盒(熒光PCR法)SRG2 /FITC 熒光素標(biāo)記突觸結(jié)合蛋白相關(guān)因2抗體IgGN-叔丁氧羰-O-芐-反式-4-羥-L-脯氨酸 98%
Synaptotagmin-4/FITC 熒光素標(biāo)記突觸結(jié)合蛋白4抗體IgG叔丁氧羰酰正亮氨酸二環(huán)己鹽 ≥98.5%
SRG5/SPATA12/FITC 熒光素標(biāo)記發(fā)生相關(guān)因5抗體IgGBOC-4-氨-L-氨酸 98%
SRG11/Spata17/FITC 熒光素標(biāo)記凋亡因抗體IgGBoc-4-氨-D-氨酸 98%
52KDa Ro/SSA /FITC 熒光素標(biāo)記核糖核蛋白抗原52kD-Ro/SSA抗體IgGBOC-L-4-氯氨酸 98.5%
SSB/La /FITC 熒光素標(biāo)記抗干燥癥SSB/La抗體IgGBOC-D-4-氯氨酸 96%
Fut4/CD15/SSEA-1 /FITC 熒光素標(biāo)記階段特異性胚胎表面抗原-1抗體IgGBOC-D-4-氟氨酸 99%
SSEA3/FITC 熒光素標(biāo)記階段特異性胚胎表面抗原-3抗體IgGBOC-L-4-氟氨酸 99%
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