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規(guī)格 | 50次 | 貨號(hào) | YS-P013945 |
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品牌 | YSRIBIO |
服務(wù)流程:
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
隱孢子蟲檢測試劑盒(熒光PCR法) | 50T | YS-P013945 |
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
雞組氨酸豐富糖蛋白(HRG) 1--煙?;锓置谛桶椎鞍酌敢种埔蜃涌贵w
雞磷脂酰肌蛋白聚糖2(GPC2) 煙酰-2,4,5,6-d42,4-二氯氧酸(除草劑)單克隆抗體
雞顆粒酶A(GzmA) N-(羥)煙酰尿素轉(zhuǎn)運(yùn)型糖蛋白抗體
雞抗補(bǔ)體1q抗體(C1q-Ab) 煙酰次二核苷酸鈉鹽雌激素誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄調(diào)制器抗體
雞γ干擾素(IFN-γ) N-(1,3,4-Thiadiazolyl)煙酰14-3-3蛋白/14-3-3 α/β/γ/δ/ε亞型抗體
雞解整合素金屬蛋白酶10(ADAM10) β-煙酰單核苷酸2,4-二氯氧酸(除草劑)抗體
雞跨膜絲氨酸蛋白酶2(TMPRSS2)環(huán)孕酮5-羥色受體1A抗體
雞表皮角蛋白(EK) 15β-羥醋酸環(huán)孕酮5羥色抗體
雞心肌營養(yǎng)素樣因子1(CLCF1) N-酰磺吡啶5-羥色受體1B抗體
雞胃蛋白酶(PP)磺吡啶-d4神經(jīng)突觸素2抗體
雞D-多巴色素變位酶(DDT) 磺吡啶鈉鹽環(huán)指蛋白142抗體
雞補(bǔ)體成分9(C9) 氫天仙子突觸結(jié)合蛋白3抗體
雞Bcl2關(guān)聯(lián)永生因3(BAG3)硫酸天仙子水合物突觸相關(guān)蛋白25抗體
雞骨形成蛋白6(BMP-6) 去馬來酸鹽氯那敏因子信號(hào)傳導(dǎo)抑制蛋白1抗體
雞足盂蛋白(PCX)二去馬來酸鹽氯那敏超氧化物歧化酶1抗體(銅/鋅過氧化物歧化酶SOD)
雞滑行蛋白α(TXLNa)S-(+)-馬來酸鹽氯那敏超氧化物歧化酶2抗體
隱孢子蟲檢測試劑盒(熒光PCR法)SPARC/FITC 熒光素標(biāo)記富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白抗體IgGO-叔丁-L-酪氨酸 95%
SP-B/FITC 熒光素標(biāo)記肺表面活性蛋白B抗體IgGO-叔丁-D-酪氨酸 98.5%
SP-D/FITC 熒光素標(biāo)記肺表面活性蛋白D抗體IgGO-芐-L-酪氨酸芐酯鹽酸鹽 98.5%
Spectrin- Alpha/FITC 熒光素標(biāo)記血影蛋白/收縮蛋白抗體IgGO-芐-L-酪氨酸酯鹽酸鹽 98.5%
SPHK1/FITC 熒光素標(biāo)記鞘氨激酶1抗體IgGL-4-溴氨酸 98%
SPHK2/FITC 熒光素標(biāo)記鞘氨激酶2抗體IgGD-4-溴氨酸 98%
Spindlin 1/SPIN-2/FITC 熒光素標(biāo)記Spindlin 1/SPIN-2 腫瘤形成相關(guān)因抗體IgGBoc-3-(1-萘)-D-氨酸 98%
SPY /FITC 熒光素標(biāo)記抗spindly抗體IgGBoc-L-3-(1-萘)-氨酸 99%
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
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