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規(guī)格 | 50次 | 貨號 | YS-P013606 |
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品牌 | YSRIBIO |
服務(wù)流程:
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
馬腺病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 | 50次 | YS-P013606 |
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。
豬蕈堿型酰膽堿受體亞型M1(M-AChRM1)植物凝膠(Sigma)二化組蛋白H3K4抗體
豬成纖維生長因子受體3(FGFR3) 右旋酮洛芬二化組蛋白H3K9抗體
豬輕肽神經(jīng)絲蛋白(NEFL)二碳酰二肼(二脲)化組蛋白H3抗體
豬轉(zhuǎn)錄因子20(TCF20)5-磺水楊酸酰化組蛋白H3抗體
豬顆粒酶B(GzmB) 1-氨-2-萘酚-4-磺酸?;M蛋白H3抗體
豬冷球蛋白(CG) 利卡西平;10,11-二氫-10-羥卡馬西平磷酸化肝核因子4α抗體
豬白共同抗原(LCA/CD45)磺酸酯高遷移率核小體結(jié)合蛋白1
豬Sp100核抗原(Sp100) 三七皂苷R2(S型)(標準品)磷酸化組蛋白H3抗體
豬促卵泡素(FSH) 無水醋酸鋅組織相容性復(fù)合體α抗體
豬43KDa Tar DNA結(jié)合蛋白(TDP43)4-羥卡唑肝生長因子激活抑制蛋白2抗體
豬角蛋白19(CK-19/KRT19) 雌激素酮硫酸鹽,去氫表雄酮硫酸鈉HOMER2抗體
豬晚期糖化終末產(chǎn)物受體(AGER) 纈更昔洛韋鹽酸鹽 瘤病調(diào)控因子1抗體(鋅指蛋白395)
豬可溶性半乳糖凝集素3(LGALS3)肌人類狀瘤病18 E6單克隆抗體
豬胸腎表達趨化因子(BRAK/CXCL14) 肌(標準品)異質(zhì)核糖核蛋白F抗體
豬催產(chǎn)素受體(OTR)3-酰吡啶異質(zhì)核糖核蛋白K抗體
豬IV型膠原α1(COL4α1) 鹽酸曲美他異質(zhì)核糖核蛋白L抗體
馬腺病毒探針法熒光定量PCR試劑盒Phospho-HSP27 (Ser15) /FITC 熒光素標記磷酸化熱休克蛋白27抗體IgG對磺酸,—水 CP,98%
Phospho-HSP27 (Ser78)/FITC 熒光素標記磷酸化熱休克蛋白27抗體IgG對磺酸,—水 ACS,≥98.5%
Phospho-HSP27 (Ser82)/FITC 熒光素標記磷酸化熱休克蛋白27抗體IgG對酮 97%
Phospho-HSP90 alpha (Thr5/7)/FITC 熒光素標記磷酸化熱休克蛋白90α抗體IgG3,5-二氨酸 98%
Beta-arrestin 1/FITC 熒光素標記β-抑制蛋白1抗體IgG5-硝間二酸 98%
Phospho-beta-Arrestin 1(Ser412) /FITC 熒光素標記磷酸化β抑制蛋白1抗體IgG2-氨-3-羥吡啶 97%
Beta-arrestin 2/FITC 熒光素標記β-抑制蛋白2抗體IgG1-烯-3-氯化咪唑 96%
Beta-Amyloid(1-16) /FITC 熒光素標記β淀粉樣肽(1-16)抗體IgG反式-(1R,2R)-2-氨環(huán)戊鹽酸鹽 97%
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