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規(guī)格 | 50次 | 貨號 | YS-P013394 |
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品牌 | YSRIBIO |
服務(wù)流程:
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
禽副粘病毒3型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 | 50次 | YS-P013394 |
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學(xué)中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。
小鼠褪黑素(MT) 三乙(色譜級)角蛋白19抗體
小鼠表面膜免疫球蛋白A(mIgA)叔丁(色譜級)1號染色體開放閱讀框147抗體
小鼠高鐵血紅蛋白(MHB) 異辛烷(色譜級)膽固21-羥化酶抗體
小鼠甲基化酶(Methylase)異辛烷(色譜級)畸胎瘤衍化生長因子抗體(C端)
小鼠尿微量白蛋白(MAU)異辛烷(色譜級)補體C1qL3鏈多肽抗體
小鼠單氧化酶(MAO)甲基叔丁基(色譜級)腫瘤/抗原27抗體(高遷移率族蛋白)
小鼠單核趨化蛋白2(MCP-2/CCL8)正丁(色譜級)1號染色體開放閱讀框228抗體
小鼠單核趨化蛋白3(MCP-3)1-氯丁烷(色譜級)碳酸酐酶3抗體
小鼠單核趨化蛋白4(MCP-4/CCL13) N,N-二甲酰(色譜級)親環(huán)蛋白(親環(huán)素)PPIA抗體
小鼠Smad同源物4(Smad4)1,4-二氧六環(huán)(色譜級)鈣網(wǎng)蛋白抗體
小鼠胃動素(MTL)乙二二甲(色譜級)腫瘤/抗原65
小鼠粘蛋白/粘液素5AC(MUC5AC) 乙酸乙酯(色譜級)2號染色體開放閱讀框25抗體
小鼠粘蛋白/粘液素5B(MUC5B) 甘油(色譜級)伴侶蛋白9抗體
小鼠粘蛋白/粘液素7(MUC7) N-甲基吡咯烷酮(NMP)(色譜級)7號染色體開放閱讀框25抗體
小鼠蕈堿型膽堿受體M1(CHRM1)甲基環(huán)己烷(色譜級)COG1蛋白抗體
小鼠蕈堿型膽堿受體M2(CHRM2)碳酸烯酯(色譜級)過敏素C3受體/補體C3受體抗體
禽副粘病毒3型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒Heme Oxygenase 1/HO-1 血紅素氧合酶 1/熱休克蛋白32抗體亞甲基藍 超純級,Dye content, >90%(HPLC)
Heme Oxygenase 1/HO-1 血紅素氧合酶 1/熱休克蛋白32抗體孔雀石綠 AR
HO-2 血紅素氧合酶2抗體鎂試劑Ⅰ 高純級,90%
HOXB4 HOXB4抗體鎂試劑Ⅰ AR
HOXc8 HOXc8抗體鎂試劑Ⅱ AR
PSGD/HOXB13 同源盒蛋白HOXB13抗體甲基紫 AR
Heparanase 乙酰肝素酶抗體甲基紫 IND(pH 0.1-2.0)
phospho-HP1 alpha (Tyr24) 磷酸化異染色質(zhì)蛋白1抗體(果蠅)1-亞硝基-2-萘酚 96%
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
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