參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：白色念珠菌檢測試劑盒（熒光PCR法）
產(chǎn)品貨號：YS-P014079

產(chǎn)品規(guī)格：50T

產(chǎn)品分類：PCR檢測試劑盒

產(chǎn)品運輸：低溫運輸

產(chǎn)品保存：-20℃保存

產(chǎn)品有效期：一年

產(chǎn)品特點：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。

實驗過程：

一、試劑準(zhǔn)備

1. DNA模板

2．公司產(chǎn)品僅用于科研對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）

3．10×PCR Buffer

4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM

5．Taq酶

二、操作步驟

1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。

10×PCR buffer             5μl

dNTP mixl                 4μl

引物1（10pM）               2μl

引物2（10PM）              2μl

Taq酶（2U/μl）            1μl

DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl

加ddH2O至               50 μl

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。

3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

特點優(yōu)勢：

1.   特異性：所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過TIANDZ及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達(dá)到100%。

2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。

3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。

4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。

5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除TIANDZ公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。

6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。

綿羊免疫球蛋白A Fc段受體(FcαR/CD89) 磷酸化增殖核多肽抗原

綿羊粘膜相關(guān)上皮趨化因子(MEC/CCL28) 足特異蛋白抗原

綿羊谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶θ2(GSTθ2/GSTt2)血小板源性生長因子-BB抗原

綿羊觸珠蛋白相關(guān)蛋白(HPR) 胰十二指腸同源異型盒因抗原

綿羊胱天蛋白酶11(P11) 果膠酶抗原

綿羊色素P450家族成員7A1(CYP7A1) 肝癌高表達(dá)因抗原

綿羊CXC趨化因子受體3(CXCR3) 腦啡肽

綿羊低密度脂蛋白受體(VLDLR)腸道肽轉(zhuǎn)運蛋白2/小肽轉(zhuǎn)運蛋白2抗原

綿羊泛素分解酶(DUB)  蛋白激酶R樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶抗原

綿羊端錨聚合酶1 (TNKS1)纖維束蛋白同源物1/肌動蛋白集束蛋白/圓線蟲紫癜 抗原

綿羊免疫球蛋白A2 (IgA2)胃蛋白酶原C蛋白抗原

綿羊蕈堿型膽堿受體M2(CHRM2)過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活子1α抗原

綿羊衰變加速因子(DAF) 顆粒蛋白前體抗原

綿羊ras同源物因家族成員a(RHOA)抑制素/腫瘤抑制因子抗原

綿羊胰腺特異性轉(zhuǎn)錄因子1α (PTF1α)蛋白激酶A(多肽)

綿羊間隙連接蛋白(Cx) 尿激酶型纖溶酶原激活因子（多肽）
白色念珠菌檢測試劑盒（熒光PCR法）NKB (Neurokinins B)  神經(jīng)激肽B（抗原）二四酸二鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.05000mol/L (0.05M

ATF2 (Activating Transcription Factor2)  活化復(fù)制因子2（多肽）二四酸二鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.02000mol/L (0.02M)

phospho-ATF2(pSer490/pSer498)  磷酸化活化復(fù)制因子2抗原二四酸二鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.01000mol/L (0.01M)

NKR ； Neurokin B receptor (Neuromedin K receptor; NK-4 receptor)  神經(jīng)激肽-B受體（抗原）二四酸二鈉,二水 色譜級，≥99.0%

ATF3 (Activating Transcription Factor3)  活化轉(zhuǎn)錄因子3抗原二四酸二鈉,二水 分子生物學(xué)和電泳級，99%

ATM(ataxia angiectasia mutated)  毛細(xì)血管擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)癥突變蛋白抗原二四酸二鈉,二水 用于植物培養(yǎng)，≥99.0%

ATF6(activating transcription factor 6)  活化轉(zhuǎn)錄因子6抗原二四酸鐵鈉 植物培養(yǎng)級

ATP1b2/Na+K+ ATPase(ATPase, Na+/K+ transporting, beta 2 polypeptide)  鈉ATP酶通道蛋白抗原月桂酸 AR，98%
使用方法：

一、樣品采集：

1、食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗要求進(jìn)行。

2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。

3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。

4、病灶部位樣品：取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。

一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。

2. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液（最好用帶芯槍頭，下同）。

4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用

6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。