參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：普羅威登斯菌通用試劑盒

產(chǎn)品貨號：YS-P013656

產(chǎn)品規(guī)格：50次

產(chǎn)品分類：PCR檢測試劑盒

產(chǎn)品運輸：低溫運輸

產(chǎn)品保存：-20℃保存

產(chǎn)品有效期：一年

產(chǎn)品特點：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。

特點優(yōu)勢：

1.   特異性：所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學分析，經(jīng)過TIANDZ及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。

2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。

3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。

4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。

5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除TIANDZ公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。

6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐

的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。
實驗過程：

一、試劑準備

1. DNA模板

2．公司產(chǎn)品僅用于科研對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）

3．10×PCR Buffer

4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM

5．Taq酶

二、操作步驟

1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。

10×PCR buffer             5μl

dNTP mixl                 4μl

引物1（10pM）               2μl

引物2（10PM）              2μl

Taq酶（2U/μl）            1μl

DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl

加ddH2O至               50 μl

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。

3．結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

使用方法：

一、樣品采集：

1、食品樣品：樣品的采集與預培養(yǎng)按照樣品的采集與預培養(yǎng)按照菌檢驗要求進行。

2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。

3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。

4、病灶部位樣品：取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。

一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。

2. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液（最好用帶芯槍頭，下同）。

4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用

6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

7. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

猴尿嘧啶核苷磷酸化酶1(UPP1)PIPES；1,4-哌二磺酸磷酸化淋巴特異性蛋白酪氨酸激酶抗體

猴抗利尿激素(ADH)4,4-二硫二吡啶膜相關(guān)蛋白酪氨酸激酶Lyn抗體

猴II A組磷脂酶A2(PLA2G2A)2,2'-二硫二吡啶磷酸化膜相關(guān)蛋白酪氨酸激酶Lyn抗體

猴碳酸酐酶IV(CA4)4-哌啶磷酸化膜相關(guān)蛋白酪氨酸激酶Lyn抗體

猴補體C3轉(zhuǎn)化酶(C3c) MOPSO, Na；3-嗎啉-2-羥磺酸鈉腦瘤相關(guān)因抗體

猴酸性成纖維生長因子(AFGF/FGF1)MOPSO；3-嗎啉-2-羥磺酸大腦邊緣系統(tǒng)相關(guān)膜蛋白抗體

猴二磷酸尿核苷葡糖酸轉(zhuǎn)移酶2家族肽B4(UGT2B4)3-(N-啉)磺酸鈉鹽神經(jīng)突觸粘附樣分子1抗體

猴成纖維生長因子6(FGF6) 3-(N-啉)磺酸半鈉鹽富含亮氨酸重復序列/Ⅲ型纖維連接蛋白4抗體

猴孕酮受體(PGR) MOPS; 3-(N-啉)磺酸層粘蛋白α4抗體(Lamininα4)

猴神經(jīng)肽Y受體Y5(NPYR5)1-氧-5-酚硫酸酯鹽層粘蛋白α4抗體(Lamininα4)

猴Bcl-2樣蛋白1(BCL2L1/BCL-X)嗎啉磺酸鈉脂質(zhì)運載蛋白1抗體

猴粘蛋白2(MUC2)嗎啉磺酸淋巴趨化因子抗體

猴內(nèi)皮抑制素(ES)MES一水；一水嗎啉磺酸低密度脂蛋白受體5樣蛋白抗體

猴鳥氨酸氨酰轉(zhuǎn)移酶(OCT)嗎啉磺酸半鈉鹽富含亮氨酸重復跨膜神經(jīng)元蛋白3抗體

猴5脂加氧酶(5-LO) MES無水；無水嗎啉磺酸扁豆凝集素

猴著絲粒蛋白E(CENPE) 羥磺酸鈉磷酸化富亮氨酸重復激酶2抗體
普羅威登斯菌通用試劑盒caspase-3 p12 subunit /FITC  熒光素標記活化半胱酸蛋白酶蛋白-3抗體IgGFmoc-L-谷氨酰 BR

Cystatin 3/CST3/FITC  熒光素標記胱抑素C/半胱氨酸蛋白酶抑制劑C抗體IgGFmoc-D-氨酸  BR

Caspase-6 (CT)/FITC  熒光素標記半胱酸蛋白酶蛋白-6抗體（C端）IgGFmoc-D-天冬酰 BR

Caspase-6 (NT)/FITC  熒光素標記半胱酸蛋白酶蛋白-6抗體(N端)IgGFmoc-L-谷氨酸γ芐脂 BR

Caspase-6 (NT)/FITC  熒光素標記半胱酸蛋白酶蛋白-6抗體(N端)IgGFmoc-D-亮氨酸 BR

P4/FITC  熒光素標記半胱酸蛋白酶蛋白-4抗體IgGFmoc-D-脯氨酸 BR

Caspase-8 /FITC  熒光素標記半胱氨酸蛋白酶8抗體IgGFmoc-D-纈氨酸 98%

FLASH/P8AP2/FITC  熒光素標記半胱氨酸蛋白酶8相關(guān)蛋白2抗體IgGFmoc-D-絲氨酸 BR