參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：小反芻獸疫病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒
產(chǎn)品貨號：YS-P013597

產(chǎn)品規(guī)格：50次

產(chǎn)品分類：PCR檢測試劑盒

產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸

產(chǎn)品保存：-20℃保存

產(chǎn)品有效期：一年

產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。

實(shí)驗(yàn)過程：

一、試劑準(zhǔn)備

1. DNA模板

2．公司產(chǎn)品僅用于科研對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）

3．10×PCR Buffer

4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM

5．Taq酶

二、操作步驟

1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。

10×PCR buffer             5μl

dNTP mixl                 4μl

引物1（10pM）               2μl

引物2（10PM）              2μl

Taq酶（2U/μl）            1μl

DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl

加ddH2O至               50 μl

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。

3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

特點(diǎn)優(yōu)勢：

1.   特異性：所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過TIANDZ及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達(dá)到100%。

2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。

3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。

4.   實(shí)用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個(gè)檢測過程為3-4個(gè)小時(shí)。

5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除TIANDZ公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。

6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。

豬蛋白磷酸酶1調(diào)控亞1A(PPP1R1A)二氫獼猴桃內(nèi)酯,奇異果內(nèi)酯HHIP蛋白抗體

豬核孔蛋白188kda(NUP188)馬西替坦;ACT064992亞鐵氧化酶抗體

豬半乳凝集素14(GAL14)組蛋白去?；敢种苿?M 344)鳥苷酸釋放因子p532蛋白抗體

豬解整合素金屬蛋白酶8(ADAM8) 2-氯-5-酰;GW 9662HERC2 E3泛素蛋白連接酶抗體

豬血管活性腸肽受體1(VIPR1)2-硝咪唑 HERC3 E3泛素蛋白連接酶抗體

豬肌鈣蛋白C2 (TNNC2)4-(三氟)-1H-咪唑 HERC4 E3泛素蛋白連接酶抗體

豬蛋白二硫化物異構(gòu)酶A5(PDIA5)2--4-三氟咪唑 HERC6 E3泛素蛋白連接酶抗體

豬質(zhì)Gla蛋白(MGP) 2-氨咪唑硫酸鹽 MMF誘導(dǎo)片段蛋白1抗體

豬胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白6(IGFBP-6)奧當(dāng)卡替(MK-0822)HERPUD蛋白家族成員2抗體

豬樁蛋白(Pax)4-硝兒茶酚尿黑酸氧化酶抗體

豬克拉拉蛋白(CC16)  4-硝兒茶酚肝生長調(diào)節(jié)因子酪氨酸激酶底物抗體

豬谷氨酸半胱氨酸連接酶修飾亞(GCLM)曲格列酮T2識別黑色素瘤抗原抗體

豬血紅蛋白C(HbC)  鹽酸阿糖胞苷肝癌HHCM蛋白抗體

豬GDP解離抑制因子1(GDI1)鹽酸阿糖胞苷(標(biāo)準(zhǔn)品)紫外切除修復(fù)蛋白RAD23A抗體

豬α1微球蛋白/bikunin前體(AMBP) 鹽酸馬尼地平紫外切除修復(fù)蛋白RAD23B抗體

豬組織蛋白酶D(CTSD)  鹽酸馬尼地平(標(biāo)準(zhǔn)品)3-羥異丁酸脫氫酶抗體
小反芻獸疫病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒PBEF1(NT)  內(nèi)脂素甘草酸  93%

Visfatin-1/PBEF1(NT)   內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素(N端抗體)羥纖維素 I型，粘度：4000mPa.s

Visfatin-1(NT)  內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素抗體（N端）羥纖維素 I型，粘度：20000mPa.s

Visfatin-2(CT)  內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素（C端抗體）羥纖維素 II型，粘度：100mPa.s

TRPV1/VR1  辣椒素受體抗體羥纖維素 II型，粘度：400mPa.s

VSIG4  T淋巴負(fù)調(diào)節(jié)蛋白抗體羥纖維素 II型，粘度：100000mPa.s

VTN  玻璃粘連蛋白抗體纖維素 15mPa.s

VTG  魚、青鳉魚卵黃蛋白原抗體纖維素 400mPa.s
使用方法：

一、樣品采集：

1、食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。

2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。

3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。

4、病灶部位樣品：取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。

一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。

2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液（最好用帶芯槍頭，下同）。

4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用

6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對照。放冰上待用。