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當前位置:上海研生實業(yè)有限公司>>PCR類>>熒光定量PCR試劑盒>> 50次牛棒桿菌PCR試劑盒

牛棒桿菌PCR試劑盒

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產(chǎn)品型號50次

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

更新時間:2021-11-20 14:41:43瀏覽次數(shù):96次

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規(guī)格 50次 貨號 YS-P013388
品牌 YSRIBIO
牛棒桿菌PCR試劑盒原理是由一對引物介導(dǎo),能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增,擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。

QQ截圖20191211135002.jpg
服務(wù)流程:

公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貨號

牛棒桿菌PCR試劑盒

50次

YS-P013388

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

循環(huán)步驟

溫度

時間

循環(huán)數(shù)

預(yù)變性

94℃

5   min

1

變性

94℃

10   sec

30-40

退火

50-65℃

20   sec

30-40

延伸

72℃

30   sec/kb

30-40

終延伸

72℃

5   min

1

反應(yīng)五要素:

參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:

①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。

②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。

③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。

⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。

引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。

組成及試劑配制:

1、酶標板:一塊(96孔)

2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。

3、 樣品稀釋液:1×20ml。

4、 檢測稀釋液A:1×10ml。

5、 檢測稀釋液B:1×10ml。

PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:

①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;

②堿基配對原則;

③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;

④靶基因的特異性與保守性。

其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高

PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學(xué)中zui小檢出率為3個細菌。

(3) 簡便、快速

PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。

(4) 對標本的純度要求低

不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。

小鼠組蛋白H2b(histon-H2b)氘代吡啶(10 g )9號染色體開放閱讀框61抗體

小鼠B淋巴瘤(BCL 10)氘代吡啶(25 g )C末端結(jié)合蛋白2抗體

小鼠透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白(HABP) 氘代吡啶(25 g )21號染色體開放閱讀框13抗體

小鼠透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白1(HABP1) 氘代吡啶(50 g)冠蛋白3抗體

小鼠透明質(zhì)酸酶(HAase)氘代鹽酸(5g )周期蛋白N端結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體

小鼠低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)氘代鹽酸(5g )膽固25羥化酶抗體

小鼠脫酶(ID)氘代鹽酸(10g)天冬氨酸-胱氨酸特異性蛋白酶家族抗體

小鼠IgG Fc片段(IgG-Fc)氘代鹽酸(10g)鈣營養(yǎng)蛋白1/鈣結(jié)合蛋白8抗體

小鼠免疫球蛋白A(IgA)氘代鹽酸(50g)鈣結(jié)合蛋白5/3抗體

小鼠免疫球蛋白E(IgE)氘代鹽酸(50g)CD98輕鏈抗體

小鼠免疫球蛋白G(IgG)氘代甲(5g)胰輔脂酶抗體

小鼠免疫球蛋白G1(IgG1)氘代甲(0.50 mL x 10 )17號染色體開放閱讀框104抗體

小鼠免疫球蛋白G2a(IgG2a)氘代甲(0.5 mL x 10 )卡因和調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄蛋白抗體

小鼠免疫球蛋白M(IgM)氘代甲(0.6ml  x 10)富半胱氨酸肝素結(jié)合蛋白61抗體

小鼠誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶(NOS2/iNOS)氘代甲(0.6ml  x 10)2號染色體開放閱讀框65抗體

小鼠抑制素A(INHA)氘代甲(10g )β連環(huán)蛋白樣蛋白1抗體
牛棒桿菌PCR試劑盒Phospho-Histone H3 (Thr11)  酸化組蛋白3抗體鹽酸副品ndicator

Phospho-Histone H3 (Thr3)  磷酸化組蛋白3抗體二苯磺酸鋇 CP

Histone H1  組蛋白H1抗體二苯磺酸鋇 98%

phospho-Histone H1 (Thr146)  磷酸化組蛋白H1抗體雙環(huán)己酮草酰二腙 98.0%

Acetylation-Histone H1b(Lys53)  乙?;M蛋白H1b抗體縮二脲 AR,98%

phospho-Histone H1.4 (Thr18)  磷酸化乙?;M蛋白H1b抗體甲酚Indicator

Histone H3-like protein  組蛋白H3樣抗體甲酚紅 AR

Histone H3-like protein  組蛋白H3樣抗體甲酚紅 98%

 


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