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當(dāng)前位置:上海研生實業(yè)有限公司>>PCR類>>熒光定量PCR試劑盒>> 50次綿羊源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒

綿羊源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒

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產(chǎn)品型號50次

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

更新時間:2021-11-19 16:16:50瀏覽次數(shù):123次

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規(guī)格 50次 貨號 YS-P013302
品牌 YSRIBIO
綿羊源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒原理是由一對引物介導(dǎo),能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增,擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。

QQ截圖20191211135002.jpg
服務(wù)流程:

公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貨號

綿羊源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒

50次

YS-P013302

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

循環(huán)步驟

溫度

時間

循環(huán)數(shù)

預(yù)變性

94℃

5   min

1

變性

94℃

10   sec

30-40

退火

50-65℃

20   sec

30-40

延伸

72℃

30   sec/kb

30-40

終延伸

72℃

5   min

1

反應(yīng)五要素:

參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:

①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。

②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。

③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。

⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。

引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。

組成及試劑配制:

1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)

2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。

3、 樣品稀釋液:1×20ml。

4、 檢測稀釋液A:1×10ml。

5、 檢測稀釋液B:1×10ml。

PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:

①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;

②堿基配對原則;

③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;

④靶基因的特異性與保守性。

其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高

PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌。

(3) 簡便、快速

PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。

(4) 對標(biāo)本的純度要求低

不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

人可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體1(sTfR1)柚皮素10號染色體開放閱讀框93抗體

人白介素12 p35(IL-12 p35)藥根堿(標(biāo)準(zhǔn)品)10號染色體開放閱讀框63抗體

人白介素25(IL-25)槲皮素 10號染色體開放閱讀框132抗體

人空泡素相關(guān)蛋白A(VacA)槲皮素(標(biāo)準(zhǔn)品)10號染色體開放閱讀框30抗體

人白介素34(IL-34)托伐普坦 10號染色體開放閱讀框140抗體

人松弛肽1(RLN1) 磺噻唑1號染色體開放閱讀框125抗體

人松弛肽3(RLN3) 磺噻唑(標(biāo)準(zhǔn)品)1號染色體開放閱讀框129抗體

人酪氨酸激酶2(Tyk-2) 環(huán)苯扎林鹽酸鹽1號染色體開放閱讀框159抗體

人酪氨酸羥化酶(TH) 鹽酸美托咪定1號染色體開放閱讀框163抗體

人雷帕霉素靶蛋白(mTOR) 京尼平甙(標(biāo)準(zhǔn)品)1號染色體開放閱讀框172抗體

Persephin蛋白(PSPN)京尼平甙1號染色體開放閱讀框2抗體

人轉(zhuǎn)化生長因子β誘導(dǎo)蛋白(TGFβI)甲睪酮; 甲基素1號染色體開放閱讀框19抗體

人轉(zhuǎn)化生長因子β激蛋白22(TSC22)四氫生物蝶呤游離堿1號染色體開放閱讀框25抗體

人白抗原A(HLA-A) 鹽酸替羅非班1號染色體開放閱讀框31抗體

人蛋白激酶C-η(PKCη)鹽酸替羅非班(標(biāo)準(zhǔn)品)1號染色體開放閱讀框51抗體

人線粒體解偶聯(lián)蛋白1(UCP-1)重去甲腎上腺素1號染色體開放閱讀框52抗體
綿羊源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒CKIP-1  酪蛋白激酶2相互作用蛋白1抗體叔丁 CP

CKMT2  肌酸磷酸激酶2抗體三(4-基) 97%

Clostridium perfringens type D  D型產(chǎn)氣莢膜梭菌抗體烯酰氯, 96%,含~0.05% 噻吩穩(wěn)定劑

CITED1/ABCC1  結(jié)合轉(zhuǎn)化激活因子CITED1抗體乙酰氯 AR,98.5%

CLCA4  鈣激活氯離子通道4抗體正丁酰氯  98%

CLEC1/CLEC1A  C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族1成員A抗體氯代異烷 CP,97%

CLEC2/CLEC1B  C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族1成員B抗體氯代異烷 GR,99%

C-Mer/MERTK  c-mer原癌基因酪氨酸激酶抗體氯乙酰氯 98%

 


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