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一種新型的熒光生物傳感器可以觀察到在活ATCC細(xì)胞中高度特異性位置發(fā)生的酶和細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)活性。
超分辨率技術(shù)如SOFI突破了光學(xué)顯微鏡的衍射極限。但是,它們只能對(duì)細(xì)胞中的靜態(tài)結(jié)構(gòu)進(jìn)行成像,而不是動(dòng)態(tài)生物活性。
他們發(fā)現(xiàn)一種新的生物傳感現(xiàn)象稱為FLINC-接觸增加熒光誘導(dǎo),當(dāng)兩種熒光蛋白緊密接觸時(shí),熒光波動(dòng)加快。 FRET((fluorescence resonance energy transfer)和BiFC(bimolecular fluorescence complementation)有機(jī)會(huì)引發(fā)FLINC。但是FRET不能與超分辨率成像兼容,BiFC是一次不可逆的熒光生成過程,無法跟蹤動(dòng)態(tài)生物活性。
研究人員開發(fā)出了一種以新的方式照亮ATCC細(xì)胞過程的生物傳感器,可與SOFI的分辨率匹配,達(dá)到約100nm的分辨率。
當(dāng)兩者接近時(shí),熒光蛋白Dronpa顯著增加另一種蛋白質(zhì)TagRFP-T的熒光波動(dòng)率。該團(tuán)隊(duì)創(chuàng)建了生物傳感器,這些蛋白質(zhì)放置在酶或信號(hào)分子中可以識(shí)別和修飾肽序列的兩端。通常,生物傳感器具有延伸的構(gòu)象,其中兩種蛋白質(zhì)距離很遠(yuǎn)。但是當(dāng)酶修飾肽序列時(shí),例如,通過磷酸化-生物傳感器變成緊湊的形狀,這使蛋白質(zhì)接近并打開可以成像的FLINC信號(hào)。使用SOFI的生物傳感器在超分辨率下實(shí)現(xiàn)了可視化ATCC細(xì)胞微區(qū)域中的激酶活性。
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