當(dāng)前位置:上海谷研實業(yè)有限公司>>生化檢測試劑盒>>輔酶Ⅱ系列>> γ谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γGT)可見分光光度法
貨號 | GOY-01S6386 |
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商品屬性:
產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 50管/48樣 |
檢測方法 | 可見分光光度法 |
貨號 | GOY-01S6386 |
商品介紹:
測定意義
γ-GT是γ-谷氨酰循環(huán)中的關(guān)鍵酶,催化GSH降解。γ-GT催化GSH或者其他γ-谷氨?;衔锷系摩?谷氨?;D(zhuǎn)移到受體。也可以催化GSH和其他γ-谷氨?;衔锏乃?,產(chǎn)生鹽,在細(xì)胞外新陳代謝中起了重要的作用。
測定原理:
γ-GT催化谷氨酰對硝基苯胺中γ-谷氨?;D(zhuǎn)移給N-甘氨酰,生成對硝基苯胺,在405nm有特征光吸收;通過測定405nm光吸收增加速率,來計算γ-GT酶活性。
自備儀器和用品:
低溫離心機、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸餾水
實驗方法學(xué):
一、肝素的配制: 市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?/span>0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。 肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動,每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。 | 二、血液樣本的收集: 全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。 1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。 2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA。 |
選擇抗凝的注意點:
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
硫化汞 紅色硫化汞 CP 十氟聯(lián)苯 99%Anti-phospho-P53 (Ser46) /FITC 熒光素標(biāo)記化腫瘤抑制基因P53抗體IgG
乙酸-2-萘酯 98%1-(2-乙基)-2-甲基-5-硝基-1H-咪唑 98%Anti-phospho-P53 (Ser6)/FITC 熒光素標(biāo)記化腫瘤抑制基因P53抗體IgG
4-肼 AR,≥98.0%二甲戊樂靈 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%Anti-phospho-P53 (Ser9)/FITC 熒光素標(biāo)記化腫瘤抑制基因P53抗體IgG
2-亞硝基-1-萘酚 98%二甲戊樂靈Anti-phospho-P53 (Thr18) /FITC 熒光素標(biāo)記化腫瘤抑制基因P53抗體IgG
正壬烷 standard for GC, ≥99.5% (GC)磺氯吡 分析標(biāo)準(zhǔn)品Anti-phospho-P53 (Thr81)/FITC 熒光素標(biāo)記化腫瘤抑制基因P53抗體IgG
正壬烷 99%磺氯吡Anti-phospho-P53 (Ser20)/FITC 熒光素標(biāo)記化腫瘤抑制基因P53抗體IgG
正壬烷 分析標(biāo)準(zhǔn)品, ≥99.8% (GC)磺二甲氧嘧鈉鹽 分析標(biāo)準(zhǔn)品Anti-phospho-P53 (Ser315)/FITC 熒光素標(biāo)記化腫瘤抑制基因P53抗體IgG
硝氮黃 Indicator磺二甲氧嘧鈉鹽 98%Anti-phospho-P53 (Ser33) /FITC 熒光素標(biāo)記化腫瘤抑制基因P53抗體IgG
γ谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γGT)可見分光光度法檢測試劑盒三氟磺鋱 98%腫瘤抑制因LPP2抗體Donkey Anti-rabbit IgG/Gold 膠體金標(biāo)記的驢抗兔IgG
四氫-2 2-二-4H--4-酮 95%腫瘤抑制因LATS1抗體Donkey Anti-rabbit IgG/FITC FITC標(biāo)記的驢抗兔IgG
2,4,6-三嘧 98%化單絲氨蛋白激1/2抗體Donkey Anti-rabbit IgG/Cy7 Cy7標(biāo)記的驢抗兔IgG
三氟磺錫 98%化腫瘤抑制因LATS1抗體Donkey Anti-rabbit IgG/Cy5.5 Cy5.5標(biāo)記的驢抗兔IgG
三氟磺銩 98%化絲氨/蘇氨蛋白激抗體Donkey Anti-rabbit IgG/Cy5 Cy5標(biāo)記的驢抗兔IgG
三氟磺釔(III) 98% 化絲氨/蘇氨蛋白激抗體Donkey Anti-rabbit IgG/Cy3 Cy3標(biāo)記的驢抗兔IgG
三氟磺鐿 97%化絲氨/蘇氨蛋白激抗體Donkey Anti-rabbit IgG/Bio 標(biāo)記的驢抗兔IgG
三氟磺鐿水合物 99.9% metals basis釋放激素類似物抗體Donkey Anti-rabbit IgG/APC APC標(biāo)記的驢抗兔IgG
三氟磺鋅 98%化核纖層蛋白A/C抗體Donkey Anti-rabbit IgG/AP 堿性(AP)標(biāo)記的驢抗兔IgG
乙偶姻 97%化淋巴特異性蛋白酪氨激抗體Donkey Anti-rabbit IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記的驢抗兔IgG
乙偶姻 分析標(biāo)準(zhǔn)品,單聚體膜相關(guān)蛋白酪氨激Lyn抗體Donkey Anti-rabbit IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的驢抗兔IgG
乙偶姻 Natural,≥96%(GC), FCC化膜相關(guān)蛋白酪氨激Lyn抗體Donkey Anti-rabbit IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的驢抗兔IgG
丁正戊酯 99%化膜相關(guān)蛋白酪氨激Lyn抗體Donkey Anti-rabbit IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的驢抗兔IgG
丁正戊酯 ≥99%, Kosher腦瘤相關(guān)因抗體Donkey anti-Rabbit IgG whole serum 驢抗兔IgG抗血清
2,3-丁二酮 98%大腦邊緣系統(tǒng)相關(guān)膜蛋白抗體Donkey Anti-rabbit IgG 驢抗兔IgG
操作步驟:
實驗開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應(yīng)預(yù)測樣品含量,如樣品濃度過高時,應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4. 每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。
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