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當(dāng)前位置:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>蛋白酶系列>> 堿性蛋白酶微量法檢測(cè)試劑盒
貨號(hào) | GOY-01S6627 |
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商品介紹
測(cè)定意義 AKP是指在堿性條件下催化蛋白質(zhì)肽鍵水解的酶類,屬于蛋白酶。此外,該酶還能夠水解酯鍵、酰胺鍵,具有轉(zhuǎn)酯及轉(zhuǎn)肽的功能。該酶是主要工業(yè)用酶之一,廣泛應(yīng)用于制藥、絲綢、食品、制革等行業(yè)。 測(cè)定原理: 在堿性條件下,AKP水解酪蛋白生成;在堿性條件下,還原磷鉬酸生成鎢藍(lán);鎢藍(lán)在680nm有特征吸收峰,測(cè)定680nm吸光度增加速率,來(lái)計(jì)算AKP活性。 自備儀器和用品: 可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、水浴鍋、磁力攪拌器、可調(diào)式移液槍、0.5 mL EP管和蒸餾水。 |
試劑的組成和配制:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;
試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
【友情提示】:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。避免給您帶來(lái)不必要的損失,請(qǐng)仔細(xì)閱讀購(gòu)買(mǎi)說(shuō)明!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測(cè)方法 | 貨號(hào) |
100管/48樣 | 微量法 | GOY-01S6627 |
所需的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本:
取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行
勻漿(或使用各類常見(jiàn)勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。
【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本:
先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL
提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);
12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10
4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。
注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于 1,建議將試劑二用蒸餾水稀釋 7 倍后使用(10μL 試劑二原液+60μL蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?對(duì)照管的范圍是 0.4-1。對(duì)照管吸光值過(guò)低可能是(1)試劑二或試劑四沒(méi)有現(xiàn)配現(xiàn)用;
(2)沒(méi)有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間 30min可以延長(zhǎng)到 40min)。對(duì)照管吸光值過(guò)高可能是試劑二未按操作說(shuō)明書(shū)稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般
將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋 10倍后再測(cè),通常可以使測(cè)定正常。
測(cè)定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測(cè)定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測(cè)定(在96孔板中依次加入下列試劑)
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測(cè)定。
鎢粉 99.98% metals basis,1-5μm正癸 98%Anti-HSP-27/HRP 辣根過(guò)氧化物標(biāo)記熱休克蛋白27抗體IgG
硒基酸 99%正癸酸 Standard for GC,>99% (GC)Anti-P-fscn1/FITC 熒光素標(biāo)記化纖維束蛋白同源物1/肌動(dòng)蛋白集束蛋白/圓線蟲(chóng)紫癜 抗體IgG
ACS正癸酸 ≥98%, FCC, FGAnti-PG-C/FITC 熒光素標(biāo)記胃蛋白原C抗體IgG
硫氫化鈉,水合 68-72 %正癸酸 AR,99%Anti-PGC-1 Alpha/FITC 熒光素標(biāo)記過(guò)氧化物體增殖物激活受體γ輔激活子1α抗體IgG
鈉 ACS正癸酸 CP,98%Anti-PGE2/FITC 熒光素標(biāo)記前列腺素E2抗體IgG
乙酰苯 AR,99.0%正癸酸 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5% (GC)Anti-PGRN /FITC 熒光素標(biāo)記顆粒蛋白前體抗體IgG
乙酰苯 CP,99.0%十二 Standard for GC,>99.5%(GC)Anti-PH-4/FITC 熒光素標(biāo)記脯水解4抗體IgG
分析標(biāo)準(zhǔn)品,C:71.09%,H:6.71%,N:10.36%十二 >98.0% (GC)Anti-PHB/FITC 熒光素標(biāo)記抑制素/腫瘤抑制因子抗體IgG
堿性蛋白酶微量法檢測(cè)試劑盒倍硫標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=6%大鼠Ⅰ型膠原C端肽(CTX-Ⅰ)免疫試劑盒癌高表達(dá)蛋白Hec1抗體Goat Anti-Bovine IgG/RBITC 羅丹明標(biāo)記的羊抗牛IgG
菊酯 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.5%(劇品)大鼠Ⅰ型膠原(Col Ⅰ)免疫試劑盒化荷爾蒙敏感脂肪抗體Goat Anti-Bovine IgG/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的羊抗牛IgG
菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=3%(劇品)大鼠17-酮類固(17-KS)免疫試劑盒組蛋白去乙?;?抗體Goat Anti-Bovine IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的羊抗牛IgG
菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=6%(劇品)大鼠17-羥孕烯酮免疫試劑盒半糖轉(zhuǎn)移2抗體Goat Anti-Bovine IgG/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的羊抗牛IgG
氟菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=3%大鼠17羥孕酮(17-OHP)免疫試劑盒化異染色質(zhì)蛋白1抗體(果蠅)Goat Anti-Bovine IgG/PE-Cy3 PE-Cy3標(biāo)記的羊抗牛IgG
氟菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=4%大鼠17羥皮質(zhì)類固(17-OHCS)免疫試劑盒異染色質(zhì)蛋白1化抗體(果蠅)Goat Anti-Bovine IgG/PE PE標(biāo)記的羊抗牛IgG
線 100μg/ml,u=3%(劇品)大鼠17-α睪酮(17-αMT)免疫試劑盒缺氧誘導(dǎo)因子2α /HIF-2α抗體Goat Anti-Bovine IgG/HRP 辣根過(guò)氧化物標(biāo)記的羊抗牛IgG
線 10μg/ml,u=4%(劇品)大鼠15脂加氧(15-LO/LOX)免疫試劑盒型流感病M2抗體Goat Anti-Bovine IgG/Gold 膠體金標(biāo)記的羊抗牛IgG
炔氟草 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.4%大鼠12羥二十烷四烯(12-HETE)免疫試劑盒熱休克蛋白-47抗體Goat Anti-Bovine IgG/FITC FITC標(biāo)記的羊抗牛IgG
嘧磺隆 分析標(biāo)準(zhǔn)品,97%大鼠11β羥類固脫氫1型(11β-HSD1)免疫試劑盒人類狀瘤病16抗體Goat Anti-Bovine IgG/Cy7 Cy7標(biāo)記的羊抗牛IgG
氟 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%大鼠1,4,5-三肌(IP3)免疫試劑盒缺氧誘導(dǎo)因子1α 抗體HIF-1αGoat Anti-Bovine IgG/Cy5.5 Cy5.5標(biāo)記的羊抗牛IgG
氟節(jié) 分析標(biāo)準(zhǔn)品,97%大鼠1,3-βD葡葡糖苷(1,3-βD glucosidase)免疫試劑盒組蛋白H3抗體Goat Anti-Bovine IgG/Cy5 Cy5標(biāo)記的羊抗牛IgG
解草 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.3%大鼠1,25-二羥(3)24-羥化,線粒體(CYP24A1)免疫試劑盒人類皰疹病8抗體/皰疹病8型Goat Anti-Bovine IgG/Cy3 Cy3標(biāo)記的羊抗牛IgG
氟吡氧乙 分析標(biāo)準(zhǔn)品,97%大鼠1,25二羥3(1,25 DHVD3)免疫試劑盒人類巨病抗體Goat Anti-Bovine IgG/Bio 標(biāo)記的羊抗牛IgG
標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/m,u=6~2%,酮大鼠 SCUBE1 免疫試劑盒人類皰疹病8抗體Goat Anti-Bovine IgG/APC APC標(biāo)記的羊抗牛IgG
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