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當(dāng)前位置:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>其它系列>> 脫氫抗壞血酸還原酶(DHAR)微量法
貨號(hào) | GOY-01S6397 |
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【友情提示】:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。避免給您帶來不必要的損失,請(qǐng)仔細(xì)閱讀購買說明!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測(cè)方法 | 貨號(hào) |
100管/96樣 | 微量法 | GOY-01S6397 |
商品介紹
測(cè)定意義 DHAR存在于細(xì)胞質(zhì)、線粒體和葉綠體中。DHAR催化GSH還原DHA生成AsA和GSSG,調(diào)控細(xì)胞AsA/DHA比值,是抗壞血酸-氧化還原循環(huán)的關(guān)鍵酶。提高植物體內(nèi)的 DHAR 活性,可提高植物食品中AsA含量,進(jìn)而提高植物食品的營養(yǎng)品質(zhì)。 測(cè)定原理: DHAR催化GSH還原DHA生成AsA,通過測(cè)定DHA減少速率,計(jì)算DHAR活性。 實(shí)驗(yàn)中所需儀器及設(shè)備: 研缽、冰、低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液器和蒸餾水。 |
試劑的組成和配制:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;
試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
所需的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本:
取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行
勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。
【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本:
先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL
提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);
12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10
4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。
注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于 1,建議將試劑二用蒸餾水稀釋 7 倍后使用(10μL 試劑二原液+60μL蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?對(duì)照管的范圍是 0.4-1。對(duì)照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;
(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間 30min可以延長(zhǎng)到 40min)。對(duì)照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般
將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋 10倍后再測(cè),通??梢允箿y(cè)定正常。
化非受體激c-Abl抗體Human MANSC1 ELISA Kit甘草素 Liquiritigenin
β淀粉樣前體蛋白結(jié)合蛋白1抗體(X11α)Human MAP4K1(MEK Kinase Kinase 1) ELISA Kit人肌腱蛋白R(shí)(TN-R)ELISA試劑盒,
載脂蛋白E抗體Human MAGEC3 ELISA Kit人β連環(huán)蛋白/聯(lián)蛋白(β-Cat)ELISA試劑盒,
甲胎蛋白AFP抗體Human MAK ELISA Kit小鼠煙酰腺嘌呤二核苷酸(NADPH)ELISA試劑盒,
陰離子交換蛋白2抗體Human MAP4K2 ELISA Kit小鼠核因子κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)ELISA試劑盒,
鐵調(diào)節(jié)蛋白1抗體Human MAGED2 ELISA Kit小鼠15脂加氧(15-LO/LOX)ELISA試劑盒,
三腺苷家族蛋白3A抗體Human MAGED1( MAGE family member D1) ELISA Kit兔子睪酮(T)ELISA試劑盒,
載脂蛋白J抗體Human MAGEF1 ELISA Kit大腸素(colicin)ELISA試劑盒--動(dòng)物,人
脫氫抗壞血酸還原酶(DHAR)微量法氣相色譜儀檢定用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(-溶液)5.03mg/ml,體:泛素結(jié)合UFC1抗體
五日生化需氧量標(biāo)準(zhǔn)品1000mg/L泛素結(jié)合E2J1抗體
水質(zhì)生化需氧量標(biāo)樣 濃度范圍:61.8-148(mg/L),分析標(biāo)準(zhǔn)品輔色素C還原核心蛋白1抗體
并(b)熒蒽標(biāo)準(zhǔn)溶液 10~100μg/mL,體:核蛋白95抗體
并(k)熒蒽標(biāo)準(zhǔn)溶液 4.38ug/ml,體:泛素結(jié)合E2變異體1抗體
標(biāo)準(zhǔn)溶液 1.00mg/ml,體:石油泛素結(jié)合E2蛋白A抗體
標(biāo)準(zhǔn)溶液 1.00mg/mL,體:乙-水泛素結(jié)合E2O抗體
溴標(biāo)準(zhǔn)溶液 100µg/mL泛素蛋白連接J2抗體
純度分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 99.95%泛素蛋白連接M抗體
氣相色譜\質(zhì)譜聯(lián)用儀校準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(異辛烷中二酮溶液) 10.0泛素蛋白連接W抗體
鄰二丁芐酯標(biāo)準(zhǔn)溶液 165.0μg/mL,溶劑:同源蛋白UNCX抗體
1,1,2,2-四乙烷標(biāo)準(zhǔn)溶液0.92mg/ml,溶劑:UL16結(jié)合蛋白3抗體
銅標(biāo)準(zhǔn)溶液 100ug/mL(20degree),體:1%HNO3去泛素化22抗體
膽固 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.0%RNA聚合I抗體
標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.117mg/ml,體:異辛烷尿鹽重吸收轉(zhuǎn)運(yùn)子1抗體
測(cè)定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測(cè)定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測(cè)定(在96孔板中依次加入下列試劑)
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測(cè)定。
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