選擇抗凝的注意點(diǎn)：

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后

用于測(cè)定。

商品屬性：

商品介紹：

測(cè)定意義

活性氧(Reactive oxygen species, ROS)包括超氧自由基、過氧化氫、及其下游產(chǎn)物過氧化物和羥化物等，研究表明，機(jī)體95％以上的活性氧（ROS）都來自于線粒體，其失衡所致的氧化應(yīng)激與細(xì)胞生長(zhǎng)增殖、發(fā)育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過程有關(guān)。

正常情況下，細(xì)胞內(nèi)抗氧化防御系統(tǒng)與氧自由基處于平衡狀態(tài)，細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）水平維持在較低的生理范圍；在病理情況下，細(xì)胞內(nèi)抗氧化系統(tǒng)與氧自由基的平衡被打破，細(xì)胞內(nèi)活性氧水平過多，就可破壞線粒體酶類、脂類和核酸，使機(jī)體出現(xiàn)氧化應(yīng)激，同時(shí)，活性氧還可攻擊線粒體DNA產(chǎn)生氧化損傷，導(dǎo)致線粒體ATP合成減少、線粒體膜電位破壞等結(jié)構(gòu)和功能變化。

因此，通過檢測(cè)活性氧的變化來判斷線粒體的功能是否正常具有重要意義。

測(cè)定原理：

熒光探針-還原型二氯熒光素 (2', 7'-dichlorodihy drofluorescin diacetate, DCFH-DA)可擴(kuò)散通過線粒體膜，在線粒體內(nèi)被酯酶水解，形成無熒光的DCFH，DCFH迅速與ROS反應(yīng)生成熒光物—氧化型二氯熒光素(2', 7'-dichlo rofluorescin, DCF)。 根據(jù)上述原理設(shè)計(jì)了利用熒光法直接定量檢測(cè)線粒體ROS產(chǎn)生速率的方法。將熒光強(qiáng)度隨時(shí)間變化的數(shù)據(jù)點(diǎn)擬合，線性回歸直線斜率與ROS產(chǎn)生的速率呈正比。

需自備的儀器和用品：

多功能酶標(biāo)儀、恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調(diào)式移液器、冰、蒸餾水。

實(shí)驗(yàn)方法學(xué)：

操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1.        加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.        棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl（在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

4.        每孔加檢測(cè)溶液B工作液（同檢測(cè)A工作液） 100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

6.        依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.       依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8.       用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。

Fmoc-D- BR2.4-D丁酯 分析標(biāo)準(zhǔn)品，99%Anti-Phospho-FLT3 (Tyr589/591) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠化FMS樣激3抗體IgG

芴甲氧羰?；?/span>-6-己酸 98%2.4-D丁酯標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=3%Anti-Phospho-FLT3 (Tyr842) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠化FMS樣激3抗體IgG

FMOC--4-甲酸 97%2.5-D丁酯標(biāo)準(zhǔn)溶液10μg/ml,u=6%,溶劑:正己烷Anti-Phospho-FLT3 (Tyr969) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠化FMS樣激3抗體IgG

N'-芴甲氧羰基-N-芐氧羰基-L-賴 98.0%2,4-滴異辛酯  分析標(biāo)準(zhǔn)品Anti-VEGFR-3/FLt-4 /FITC  熒光素標(biāo)記血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體-3IgG

N-alpha-芴甲氧羰基-N-in-叔丁氧羰基-D- 97%順式戊菊酯 分析標(biāo)準(zhǔn)品，99%Anti-VEGFR-3/FITC  熒光素標(biāo)記血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體-3抗體IgG

FLAG® Peptide菊酯 分析標(biāo)準(zhǔn)品，99.5%Anti-HSP-70/RBITC  羅丹明標(biāo)記熱休克蛋白-70抗體IgG

纖維蛋白肽 B 人類 ≥97% (HPLC)基阿維菌素苯甲酸鹽 分析標(biāo)準(zhǔn)品，90.5%Anti-VHL/FITC  熒光素標(biāo)記一種腫瘤抑制因子抗體IgG

甘-L-亮 98%乙蒜素 分析標(biāo)準(zhǔn)品，99%Anti-Vimentin/FITC  熒光素標(biāo)記波形蛋白抗體IgG

線粒體活性氧產(chǎn)生速率（ROS）熒光法檢測(cè)試劑盒環(huán)溴 99%Anti-BrdU  溴脫氧尿苷抗體人鈣非依賴性脂A2(iPLA2)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

環(huán)溴 98%Anti-BRN3A  轉(zhuǎn)錄因子Brn3蛋白抗體人鳥苷環(huán)化激活因子2B(GUCA2B)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

對(duì)叔丁酯 99%Anti-Brs3/Bombesin Receptor 3  蛙皮素受體3抗體人顆粒K(GZMK)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

對(duì)氨乙酮 99%Anti-SMARCA4/SNF2 beta  抑癌因SNF2β抗體人花生四烯脂加氧3(ALOXE3)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

4-羥二酮 98%Anti-Brucella  布魯氏菌抗體人色素P450家族成員26A1(CYP26A1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

2-巰-1-咪唑 98%Anti-BRMS-1  癌轉(zhuǎn)移抑制因1抗體人血紅蛋白(HB)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

環(huán)己鹽鹽 電子級(jí)Anti-Brucella  布氏桿菌菌體蛋白抗體人全色素C合(HCCS)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

二乙酰一肟 ARAnti-BSA  牛血清白蛋白抗體人鈣/鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激IIα(CAMK2α)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

二乙酰一肟  >98.0%(GC)Anti-BSEP  膽汁鹽輸出泵蛋白抗體人Bcl2關(guān)聯(lián)永生因3(BAG3)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

氫 AR,≥47.0%Anti-Bone sialoprotein  骨涎蛋白抗體人芳硫酯B(ARSB)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒  

鈉 80%（劇品）Anti-BTG2/TIS21  B遷移因2抗體人組氨豐富糖蛋白(HRG)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

間溴氟 99%Anti-BTK/ATK  蛋白酪氨激ATK抗體人硫乙酰肝素蛋白多糖(HSPG)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

三氧化二銻 SPAnti-Phospho-Btk(Ser180)  化蛋白酪氨激ATK抗體人膜聯(lián)蛋白A5(ANXA5 )聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒  

三氧化二銻 99.99% metals basisAnti-Phospho-Btk(Tyr223)  化蛋白酪氨激ATK抗體人HtrA絲氨肽1(HTRA1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

銻粒 99.999% metals basis,beads,1-6 mmAnti-C5a  過敏素C5a（補(bǔ)體C5a）抗體人白介素10受體β(IL10Rβ)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒