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當(dāng)前位置:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>其它系列>> 脂質(zhì)過氧化物(LPO)可見分光光度法
貨號(hào) | GOY-01S6412 |
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操作步驟:
實(shí)驗(yàn)開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量,如樣品濃度過高時(shí),應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4. 每孔加檢測(cè)溶液B工作液(同檢測(cè)A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。
商品屬性:
產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 50管/48樣 |
檢測(cè)方法 | 可見分光光度法 |
貨號(hào) | GOY-01S6412 |
商品介紹:
測(cè)定意義
脂質(zhì)過氧化是動(dòng)植物體內(nèi)活性氧(ROS)氧化生物膜的過程,脂質(zhì)過氧化物(LPO)是脂質(zhì)過氧化過程的產(chǎn)物,即ROS與生物膜的磷脂、酶和膜受體相關(guān)的多不飽和脂肪酸的側(cè)鏈及核酸等大分子物質(zhì)起脂質(zhì)過氧化反應(yīng)形成LPO,使細(xì)胞膜的流動(dòng)性和通透性發(fā)生改變,最終導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的改變。因此,LPO常被作為機(jī)體氧化應(yīng)激的一種指標(biāo),與某些疾病的病理過程,如腫瘤、化學(xué)中毒、感染、炎 癥、自身免疫疾病、動(dòng)脈粥樣硬化(AS)及心腦血管疾病,以及衰老等生理過程密切相關(guān)。
測(cè)定原理:
LPO在酸性條件下加熱,產(chǎn)生小分子終產(chǎn)物MDA,MDA與硫代酸(thiobarbituric acid,TBA)縮合,生成紅色產(chǎn)物,在535nm有最大吸收峰。
需自備的儀器和用品:
分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制: 市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。 肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。 | 二、血液樣本的收集: 全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。 1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。 2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA。 |
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
亮抑肽Anti-ADGRG5 Antibody杏葉防風(fēng)Apricot?Leaves wind
促胃泌素釋放肽(抗原)Anti-ADGRF5 Antibody蒺藜Tribulus terrestris
牛血清白蛋白(標(biāo)準(zhǔn))Anti-ADGRG1 Antibody玳瑁Tortoise shell
髓鞘堿性蛋白(多肽)大鼠Anti-ADGRG5 AntibodyDonkFS- hide gelatin
血管活性腸肽Anti-ADGRG6 AntibodyLindera
肽Anti-ADGRL2 Antibody買麻藤(小葉買麻藤)Gnetum?(Oba
胰高血糖素樣肽-2蛋白Anti-ADGRL1 Antibody固公果根Radix Rosae giganteae
活性依賴的神經(jīng)保護(hù)肽(抗原)Anti-ADGRL4 Antibody荷葉Lotus leaf
脂質(zhì)過氧化物(LPO)可見分光光度法二芐酮 99%人Toll樣受體2(TLR2)免疫試劑盒蓬亂蛋白1抗體PAFAH1B3/PAFAHG 血小板衍化生長(zhǎng)因子γ抗體
3,5-二芐溴 98%人Toll樣受體1(TLR1)免疫試劑盒肌Dystrobrevin β蛋白抗體PAFAH1B2 血小板衍化生長(zhǎng)因子β抗體
二乙酮 98%人TH糖蛋白(THP)免疫試劑盒異常原/脫-γ-羧原抗體PAF 血小板活化因子抗體
四庚 PIC人TGF-β誘導(dǎo)早期因1(TIEG1)免疫試劑盒結(jié)蛋白抗體PADI4 關(guān)節(jié)炎相關(guān)因抗體
咪唑 99%人Tau蛋白免疫試劑盒DISC1 C端抗體PACRG 麻瘋病和帕金森氏病共同調(diào)節(jié)蛋白抗體
4-咪唑 98%人TAR DNA結(jié)合蛋白43(TARDBP/TDP43)免疫試劑盒DISC1 N端抗體PACAP-38 腺苷環(huán)化激活肽-38抗體
1,2-并異噻唑啉-3-酮 98%人s腺苷同型半胱氨(SAH)免疫試劑盒多能發(fā)育相關(guān)因2抗體PACAP-27/38 腺苷環(huán)化激活肽-27/38抗體
2, 2’-二硫代二 98%人Syndecan-3/(SDC3)免疫試劑盒結(jié)腸直腸癌缺失因抗體PACAP R1 腺苷環(huán)化激活肽受體1抗體
三乙酯 99%人Syndecan-1/CD138(SDC1)免疫試劑盒多巴脫羧抗體PABP (Methyl Arg455/460) 化多聚腺苷結(jié)合蛋白抗體
酯 99%人SWI/SNF相關(guān), 質(zhì)關(guān)聯(lián),肌動(dòng)蛋白依賴染色質(zhì)調(diào)控因子,亞家族c,成員1(SMARCC1)免疫試劑盒防御素β1/Defensin β1抗體PABP 多聚腺苷結(jié)合蛋白抗體
菲 97%人STEAP家族成員4(Steap4)免疫試劑盒抗體P95/NBS1 DNA修復(fù)蛋白NBS1抗體
L-a-氨己二 98%人STEAP家族成員1(Steap1)免疫試劑盒DLX4抗體p95 NBS1/Cell cycle regulatory protein p95 周期調(diào)節(jié)蛋白P95抗體
過氧化鈉 ACS reagent, ≥93.0%人Stathmin 1(STMN1)免疫試劑盒DTX1抗體P73 protein P73腫瘤抑制因抗體
硫辛 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98%人STAT3蛋白抑制分子(PIAS3)免疫試劑盒絲裂原活化蛋白激-1抗體p73 alpha p53相關(guān)蛋白P73α抗體
黃芪皂苷 III 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98%人Spondin-2 免疫試劑盒絲裂原活化蛋白激-2抗體p70 S6 Kinase Beta 2/P70 Beta 2 核糖體S6蛋白激β2抗體
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