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NADP蘋果酸酶(NADPME)測(cè)試盒紫外分光光度法
貨號(hào) | BJ-0161121-1 |
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商品介紹:
測(cè)定意義: ME廣泛存在于微生物、培養(yǎng)細(xì)胞、動(dòng)物和植物胞漿中,尤其在植物組織中活性較高。ME催化蘋果酸氧化脫羧的可逆反應(yīng),產(chǎn)生丙酮酸和CO2,以及伴隨NAD(P)+的還原反應(yīng),是蘋果酸代謝的關(guān)鍵酶。ME活性與生物合成和抗氧化密切相關(guān)。近年來(lái)植物ME活性測(cè)定較多,已經(jīng)成為抗氧化研究的熱點(diǎn)。根據(jù)fu酶專一性和對(duì)底物特異性的不同,可將ME分為NAD-ME(EC1.1.1.38)和NADP-ME(EC1.1.1.40)。 測(cè)定原理: NADP-ME催化NADP+還原成NADPH,在340nm下測(cè)定NADPH增加速率。 需自備的儀器和用品: 紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。 |
特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱 | 檢測(cè)方法 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
NAD蘋果酸酶(NADME)測(cè)試盒微量法 | 微量法 | 100管/96樣 | BJ-0161121-1 |
測(cè)定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測(cè)定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測(cè)定(在96孔板中依次加入下列試劑)充分混勻,室溫靜置30min后,450nm處測(cè)定各管吸光值A(chǔ)。
注意事項(xiàng):
待測(cè)樣品-70℃可保存1個(gè)月。需注意反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致SOD部分失活。
一個(gè)試劑盒如果不能在3次內(nèi)使用完畢,其中的WST-8需要在使用時(shí)適當(dāng)分裝,以避免反復(fù)凍融導(dǎo)致的檢測(cè)效果下降。
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋時(shí)所用的稀釋液應(yīng)盡量與樣品一致。樣品用試劑盒提供的SOD樣品制備液制備時(shí),標(biāo)準(zhǔn)品也宜使用SOD樣品制備液進(jìn)行稀釋;當(dāng)樣品為血液等無(wú)需處理的樣品時(shí),宜使用試劑盒提供的SOD檢測(cè)緩沖液稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。
抗氧化物會(huì)對(duì)本試劑盒的檢測(cè)產(chǎn)生干擾,例如0.1mM ascorbic acid,5mM GSH都會(huì)使測(cè)定出來(lái)的吸光度顯著升高。此時(shí)盡管樣品沒(méi)有顏色,如果設(shè)置了使用說(shuō)明中的空白對(duì)照3,就可以消除樣品中的抗氧化物的干擾。
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽。
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
優(yōu)點(diǎn)如下:
1、快速簡(jiǎn)便:全程約50分鐘,可測(cè)100例左右樣本。
2、取樣量微:本法取手指或耳垂等末梢血20ul~50ul即可測(cè)紅細(xì)胞中的SOD,只需2ml靜脈血可測(cè)白細(xì)胞中的SOD及血小板中SOD,只需50mg左右組織就可測(cè)組織勻漿、胞漿中的SOD,0.2g組織可測(cè)線粒體及微粒體中的SOD。
3、靈敏度高:IC50=0.05g/ml,是鄰苯三酚法的18倍。
4、穩(wěn)定性好:試劑盒2~8℃存放6個(gè)月有效。
5、再現(xiàn)性好:變異系數(shù)CV=1.7%。
6、回收試驗(yàn): X =103.3%。
7、受外界影響因素?。焊蓴_因素少,重復(fù)性強(qiáng)。
8、測(cè)試面廣:可測(cè)動(dòng)物血液、組織、各種體液、灌流液等、各種培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)菌、植物組織、各種水產(chǎn)以及化妝品、保健品等,效果均佳。
磷酸化NF-κB活化激酶抗體產(chǎn)氣莢膜梭菌 suC型人腸微血管內(nèi)皮*培養(yǎng)基
馬鈴薯球蛋白(結(jié)節(jié)性硬化)抗體豬丹絲菌RBE, 人肝膽管癌
磷酸化馬鈴薯球蛋白(結(jié)節(jié)性硬化)抗體不動(dòng)桿菌SF9, 昆蟲卵巢
磷酸化馬鈴薯球蛋白(結(jié)節(jié)性硬化)抗體蘇云金芽孢桿菌肯尼亞亞種人胃粘膜上皮*培養(yǎng)基
磷酸化馬鈴薯球蛋白(結(jié)節(jié)性硬化)抗體變形假單胞菌人胰腺星狀*培養(yǎng)基
磷酸化馬鈴薯球蛋白(結(jié)節(jié)性硬化)抗體異常漢遜酵母HSC-T6, 大鼠肝星狀系
磷酸化馬鈴薯球蛋白(結(jié)節(jié)性硬化)抗體圓錐節(jié)叢孢人心房肌*培養(yǎng)基
磷酸化微管相關(guān)蛋白抗體鏈狀鐮孢人臍帶單核*培養(yǎng)基
非受體型酪an酸蛋白激酶Tnk1抗體木糖葡糖酸醋桿菌人肺成纖維*培養(yǎng)基
磷酸化非受體型酪an酸蛋白激酶Tnk1抗體光帽鱗傘(滑菇)HK-2, 人腎皮質(zhì)近曲小管上皮
磷酸化DNA拓普西異構(gòu)酶Ⅱ抗體大腸埃希氏菌人腸動(dòng)脈內(nèi)皮*培養(yǎng)基
環(huán)腺苷酸應(yīng)答元件結(jié)合蛋白轉(zhuǎn)錄共激活因子TORC1抗體黏液桿菌人甲狀腺濾泡上皮*培養(yǎng)基
磷酸化CREB轉(zhuǎn)錄共激活因子TORC1抗體禿裸鏈霉菌大鼠骨髓間充質(zhì)干(BMSCs)
CREB轉(zhuǎn)錄共激活因子TORC2抗體水質(zhì)糞大腸菌群質(zhì)控樣品(多管發(fā)酵法)HBE, 正常人支氣管上皮系
腫瘤壞死因子β抗體(TNFβ)*蜜環(huán)菌人直結(jié)腸平滑肌*培養(yǎng)基
NAD蘋果酸酶(NADME)測(cè)試盒微量法糖原合成酶激酶3β(GSK3β)試劑盒 Anti-CXCL10 Antibody類風(fēng)濕因子
CC趨化因子受體1(CCR1)試劑盒 Anti-CXCL12 Antibody視網(wǎng)膜色su上皮特異性蛋白65
神經(jīng)肽Y(NPY)試劑盒Anti-CXCL12 AntibodyRhoB蛋白
過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ( PPAR-γ)試劑盒Anti-CXCL16 AntibodyG蛋白偶聯(lián)受體135/松弛su受體3
生長(zhǎng)調(diào)節(jié)致癌基因β(GROβ)試劑盒 Anti-CXCL13 Antibody絲an酸蛋白激酶1
多巴脫羧酶(DDC)試劑盒 Anti-CXCL13 Antibody(PB0726)環(huán)指蛋白41
促胰液su/su受體(SCTR)試劑盒Anti-CXCL2 Antibody核基質(zhì)蛋白21
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