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口蹄疫病毒(A4亞型)保存

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所  在  地上海市

更新時(shí)間:2020-11-22 20:27:35瀏覽次數(shù):167次

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口蹄疫病毒(A4亞型)保存低溫保存法,將生長(zhǎng)穩(wěn)定期的細(xì)胞懸浮在10%甘油或其他低冰點(diǎn)液體中,密封于安瓿管內(nèi),然后控制冷卻速度,使安瓿管溫度逐步下降至 -35℃時(shí),即可置于-150~-196℃的液氮罐中保存。大多數(shù)微生物如病毒、噬菌體、多種細(xì)菌、放線菌、酵母和原蟲、特別是一些用冷凍干燥法有困難的微生物,都可用此法長(zhǎng)期保存。

規(guī)格參數(shù):
資源名稱  口蹄疫病毒(A4亞型)保存
種屬: Aphthovirus│Foot and mouth disease virus

分離基物: 病料

提供形式: 凍干物

安全等級(jí): 4

模式菌株: no

應(yīng)用領(lǐng)域: 檢驗(yàn)

培養(yǎng)基: 0

生長(zhǎng)條件: 37

存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法;

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儀器設(shè)備與器具:
1 恒溫培養(yǎng)箱:36±1℃。
2 1000ml三角燒瓶、1ml、10ml移液管。
3 接種針。
4 顯微鏡。
5 超凈工作臺(tái)。
6 玻片、酒精燈、洗耳球、試管架。
7 天平:感量0.01g。
8 滅菌釜。
9 培養(yǎng)皿(直徑為90mm)、試管,經(jīng)121℃、30分鐘滅菌。
10試管夾、酒精燈、秒表、載玻片
培養(yǎng)方法:
培養(yǎng)基 乳酸菌培養(yǎng)基 Ⅱ:Lacto-casein peptone (乳酪蛋白胨) 10g Beef extract 10g Yeast extract (酵母膏) 5g Glucose (葡萄糖) 5g Tween (吐溫) 80 1g K2HPO4 2g Na-acetate (醋酸鈉) 5g Diamine citrate (檸檬酸二胺) 2g MgSO4.7H2O 0.2g MnSO4.H2O 0.05g Distilled water (蒸餾水) 1000m pH 6.5-6.8。121℃,15min。
傳代方法 ①凍干管:75%酒精擦拭管壁,后用砂輪在凍干管壁劃兩圈,掰斷,用200μL無菌水或培養(yǎng)基充分溶解,平板涂布,活化培養(yǎng)。 ②斜面:試管口用75%酒精擦拭后,火焰灼燒,后用無菌接種鏟切塊,挑取接入平板或斜面,培養(yǎng)。
生長(zhǎng)條件 30℃,好氧
存儲(chǔ)條件 2-8℃冷藏
低溫存法:
①簡(jiǎn)單保存法,產(chǎn)品僅用于科研將瓊脂斜面孢子培養(yǎng)物、菌絲懸浮液以及由麩皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培養(yǎng)物置于4℃冰箱保存,保存時(shí)間不超過1~2個(gè)月,若將谷物原料制備的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蠟,以隔絕外界空氣和水汽,保持時(shí)間可達(dá)3~4個(gè)月;②液氮超低溫保存法,將生長(zhǎng)穩(wěn)定期的細(xì)胞懸浮在10%甘油或其他低冰點(diǎn)液體中,密封于安瓿管內(nèi),然后控制冷卻速度,使安瓿管溫度逐步下降至 -35℃時(shí),即可置于-150~-196℃的液氮罐中保存。大多數(shù)微生物如病毒、噬菌體、多種細(xì)菌、放線菌、酵母和原蟲、特別是一些用冷凍干燥法有困難的微生物,都可用此法長(zhǎng)期保存。
基本概念:
(1)菌群:由多種細(xì)菌混合組成的相對(duì)穩(wěn)定的細(xì)菌群體,具有某些共同性狀。如大腸菌群包括大腸桿菌、產(chǎn)氣腸細(xì)菌及他們之間的過渡類型。
(2) 菌屬:菌種的上一級(jí)分類,通常性狀相近、親緣關(guān)系密切的若干菌種組成一個(gè)菌屬,如芽孢桿菌屬、葡萄球菌屬、乳桿菌屬等。
(3)是細(xì)菌基本的分類單位,通常指表型特征相似、親緣關(guān)系接近的一類細(xì)菌群體,與同屬內(nèi)其他種有著明顯差異;當(dāng)涉及到細(xì)菌保存時(shí),菌種是指細(xì)菌的種子(用來長(zhǎng)期保存)資源。
(4) 菌型:同一菌種的不同細(xì)菌,在某些方面存在較小差異的為同一菌型,通常一個(gè)菌種內(nèi)的細(xì)菌可以分為多種不同的菌型。
(5) 菌株:由一個(gè)獨(dú)立分離的單細(xì)胞系培養(yǎng)而成的純遺傳型群體及其一切后代,一種微生物的每一個(gè)不同來源的純培養(yǎng)物均可稱為該菌種的一個(gè)菌株。
鏈球菌(不定種)安全等級(jí)2提供形式凍干物種屬Streptococcus│sp.

傳染性支氣管炎病毒安全等級(jí)2提供形式凍干物種屬Coronavirus│Infectious bronchitis virus

禽腦脊髓炎病毒安全等級(jí)2提供形式凍干物種屬Enterovirus│Avian encephalomyetitis virus

大腸埃希菌安全等級(jí)2提供形式凍干物種屬Escherichia│coli

牛瘟病毒安全等級(jí)2提供形式凍干物種屬M(fèi)orbillivirus│Rinderpest virus

兔出血癥病毒安全等級(jí)3提供形式凍干物種屬Lagovirus│Rabbit hemorrhagic disease virus

單核細(xì)胞增生李斯特菌安全等級(jí)2提供形式凍干物種屬Listeria│mocytogenes

DH5α大腸桿菌克隆菌株應(yīng)用領(lǐng)域基本應(yīng)用:用于基因克隆 基因型: F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoA模式菌株未知種屬DH5α Strain

小鼠骨橋蛋白elisa檢測(cè)試劑盒

英文名稱:Mouse Osteopontin ELISA KIT

反應(yīng)性:Mouse

樣品類型:Serum, plasma, Cell culture supernatant

靈敏度:8 pg/ml

檢測(cè)目標(biāo):Osteopontin/OPN

應(yīng)用:Sandwich ELISA
妥布英文名稱:Tobramycin保存:20℃,避光規(guī)格:200mg小鼠增殖細(xì)胞核抗原單克隆一抗

卷曲英文名稱:Capreomycin保存:20℃,避光規(guī)格:200mg化視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤樣蛋白p107一抗

去萬古英文名稱:rvancomycin保存:20℃,避光規(guī)格:150mg視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤相關(guān)蛋白p130一抗

麥迪英文名稱:Maddie mycin保存:20℃,避光規(guī)格:200mg蛋白酶2Cα一抗

南板藍(lán)根英文名稱:Rhizoma et Radix Baphicacanthis Cusiae保存:20℃,避光規(guī)格:5gB淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)成熟蛋白1一抗

乳香英文名稱:Frankincense保存:20℃,避光規(guī)格:0.5g成對(duì)螺旋細(xì)絲蛋白一抗

陳皮英文名稱:Dried tangerine peel保存:20℃,避光規(guī)格:1g植烷氧化酶一抗

靈芝英文名稱:Gaderma lucidum保存:20℃,避光規(guī)格:2g蛋白二鍵異構(gòu)酶P4HB一抗

沒藥(天然沒藥)英文名稱:Myrrh (NATURAL myrrh)保存:20℃,避光規(guī)格:1g蛋白激酶C一抗

仙鶴草英文名稱:Agrimonia pilosa保存:20℃,避光規(guī)格:1g蛋白酶體復(fù)合物C5一抗

木芙蓉葉英文名稱:Hibiscus leaves保存:20℃,避光規(guī)格:1g重組豬腦結(jié)構(gòu)蛋白一抗

千里光英文名稱:Climbing Groundsel Herb保存:20℃,避光規(guī)格:10g脂酶A2激活蛋白一抗

干蟾皮英文名稱:Dried toad skin保存:20℃,避光規(guī)格:0.5g胸苷化酶一抗

湖北貝母英文名稱:Hubei Fritillaria保存:20℃,避光規(guī)格:5g早老素蛋白2一抗

狼毒(月腺大戟)英文名稱:Slera chamaejasme (Euphorbia ebracteolata Hayata)保存:20℃,避光規(guī)格:4.0gpiwi樣2蛋白一抗

相思子英文名稱:Abrin保存:20℃,避光規(guī)格:5g豬瘟一抗

瓦松英文名稱:Wa Song保存:20℃,避光規(guī)格:1g脂滴包被蛋白PerilipinA一抗
口蹄疫病毒(A4亞型)保存乙醇胺激酶β抗體Glabralide B中文名:別名:分子式:C21H26O3

卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白5抗體Glabralide C中文名:別名:分子式:C29H40O4

有絲分裂著絲粒蛋白F抗體Muricarpone B中文名:別名:分子式:C19H22O5

細(xì)胞周期通道和神經(jīng)細(xì)胞分化蛋白1抗體Eulophiol中文名:別名:9,10-Dihydro-2,7-dimethoxyphenanthrene-1,5-diol分子式:C16H16O4

凝集蛋白家族10抗體(肝)3-(3-Hydroxybutyl)phel中文名:別名:分子式:C10H14O2
微生物培養(yǎng)方法:
1、平板劃線分離法:把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細(xì)胞用接種環(huán)圈在平板培養(yǎng)基表面,通過分區(qū)劃線稀釋而得到較多獨(dú)立分布的單個(gè)細(xì)胞,經(jīng)培養(yǎng)后生長(zhǎng)繁殖成單菌落。
2、稀釋涂布平板法將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋,然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進(jìn)行培養(yǎng),在稀釋度足夠高的菌液里,聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞,從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落。
上述兩種方法雖然都可以實(shí)現(xiàn)觀察菌落特征的目的,但平板劃線分離法不能對(duì)菌落計(jì)數(shù),而稀釋涂布平板法培養(yǎng)過程復(fù)雜,對(duì)平板的要求比較高,產(chǎn)品僅用于科研可參照以下步驟:
a、制備平板培養(yǎng)基將蔗糖瓊脂培養(yǎng)基加熱溶化并冷卻至65℃,向蔗糖瓊脂培養(yǎng)基中加入克林霉素溶液3~5ml并混合均勻,然后取20ml混合均勻的培養(yǎng)基溶液倒入培養(yǎng)皿,輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)皿,使培養(yǎng)基溶液均勻分布在培養(yǎng)皿底部,待培養(yǎng)基溶液凝固后即得平板培養(yǎng)基。
b、制備活性污泥混合液稱取活性污泥土樣15g,放入盛100ml無菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶中,振搖15~20min混合均勻,用一支1ml無菌吸管從中吸取1ml土壤懸液加入盛有9ml無菌水的大試管中充分混勻,制成活性污泥混合液。
c、培養(yǎng)基涂布從活性污泥混合液中吸取0.2ml,滴在平板培養(yǎng)基表面的中央位置,用無菌玻璃涂棒將活性污泥混合液沿同心圓方向輕輕地向外擴(kuò)展,使之分布均勻。

 

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