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當(dāng)前位置:上海邦景實(shí)業(yè)有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>脂肪酸代謝系列>> ADPG焦磷酸化酶(AGP)測(cè)試盒微量法
貨號(hào) | BJ-01611208-1 |
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商品介紹:
測(cè)定意義 AGP (EC 2.7.7.21)主要存在于植物中,催化葡萄糖-1-磷酸與ATP反應(yīng)生成淀粉合成的直接前體ADPG,是植物淀粉生物合成的主要限速步驟。 測(cè)定原理 AGP催化的逆向反應(yīng)生成G1P,在反應(yīng)體系中添加的磷酸己糖變位酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH,340nm下測(cè)定NADPH增加速率,即可計(jì)算AGP活性。 需自備的的儀器和用品 紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水 |
特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱 | 檢測(cè)方法 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
ADPG焦磷酸化酶(AGP)測(cè)試盒微量法 | 微量法 | 100管/96樣 | BJ-01611208-1 |
測(cè)定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測(cè)定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測(cè)定(在96孔板中依次加入下列試劑)充分混勻,室溫靜置30min后,450nm處測(cè)定各管吸光值A(chǔ)。
注意事項(xiàng):
待測(cè)樣品-70℃可保存1個(gè)月。需注意反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致SOD部分失活。
一個(gè)試劑盒如果不能在3次內(nèi)使用完畢,其中的WST-8需要在使用時(shí)適當(dāng)分裝,以避免反復(fù)凍融導(dǎo)致的檢測(cè)效果下降。
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋時(shí)所用的稀釋液應(yīng)盡量與樣品一致。樣品用試劑盒提供的SOD樣品制備液制備時(shí),標(biāo)準(zhǔn)品也宜使用SOD樣品制備液進(jìn)行稀釋;當(dāng)樣品為血液等無(wú)需處理的樣品時(shí),宜使用試劑盒提供的SOD檢測(cè)緩沖液稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。
抗氧化物會(huì)對(duì)本試劑盒的檢測(cè)產(chǎn)生干擾,例如0.1mM ascorbic acid,5mM GSH都會(huì)使測(cè)定出來(lái)的吸光度顯著升高。此時(shí)盡管樣品沒(méi)有顏色,如果設(shè)置了使用說(shuō)明中的空白對(duì)照3,就可以消除樣品中的抗氧化物的干擾。
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽。
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
優(yōu)點(diǎn)如下:
1、快速簡(jiǎn)便:全程約50分鐘,可測(cè)100例左右樣本。
2、取樣量微:本法取手指或耳垂等末梢血20ul~50ul即可測(cè)紅細(xì)胞中的SOD,只需2ml靜脈血可測(cè)白細(xì)胞中的SOD及血小板中SOD,只需50mg左右組織就可測(cè)組織勻漿、胞漿中的SOD,0.2g組織可測(cè)線粒體及微粒體中的SOD。
3、靈敏度高:IC50=0.05g/ml,是鄰苯三酚法的18倍。
4、穩(wěn)定性好:試劑盒2~8℃存放6個(gè)月有效。
5、再現(xiàn)性好:變異系數(shù)CV=1.7%。
6、回收試驗(yàn): X =103.3%。
7、受外界影響因素小:干擾因素少,重復(fù)性強(qiáng)。
8、測(cè)試面廣:可測(cè)動(dòng)物血液、組織、各種體液、灌流液等、各種培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)菌、植物組織、各種水產(chǎn)以及化妝品、保健品等,效果均佳。
人組織因子途徑抑制物居巖牙殖球菌人乙酰fu酶A(A-CoA)elisa定量檢測(cè)試劑盒
小鼠可溶性血管內(nèi)皮蛋白C受體環(huán)柄菇人破骨相關(guān)受體(OSCAR)elisa定量檢測(cè)試劑盒
大鼠性磷酸酶擬青霉人葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)elisa定量檢測(cè)試劑盒
人干擾su誘導(dǎo)蛋白10彩色豆馬勃人白介su7受體(IL7R)elisa定量檢測(cè)試劑盒
小鼠嗜酸粒趨化因子釀酒酵母人破骨分化因子(ODF)elisa定量檢測(cè)試劑盒
大鼠血管性血友病因子裂解蛋白mei釀酒酵母人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子D(VEGF-D)elisa定量檢測(cè)試劑盒
人白介su1多粘芽孢桿菌人外基質(zhì)金屬蛋白mei誘導(dǎo)因子(EMMPRIN/CD147)elisa定量檢測(cè)試劑盒
大鼠血管生成su4側(cè)耳人環(huán)腺苷二磷酸核糖水解酶(cADPRH/CD38)elisa定量檢測(cè)試劑盒
小鼠嗜酸粒趨化蛋白匍枝根霉(黑根霉)人游離前列腺特異性抗原(F-PSA)elisa定量檢測(cè)試劑盒
人白介su17多毛孢菌人載脂蛋白B48(ApoB48)elisa定量檢測(cè)試劑盒
大鼠脂多糖結(jié)合蛋白香榧嗜藍(lán)孢孔菌人空泡su相關(guān)蛋白A(VacA)elisa定量檢測(cè)試劑盒
小鼠E選擇su杉葉散斑殼人亮氨酰氨基肽酶(LAP)elisa定量檢測(cè)試劑盒
小鼠凋亡相關(guān)因子沃克曼枸櫞酸桿菌白G4(IgG4)elisa定量檢測(cè)試劑盒
大鼠乙脫氫酶單增李斯特菌*人核苷磷酸化酶1(UPP1)elisa定量檢測(cè)試劑盒
人白介su1β (IL-1B)綠色木霉=木su木霉人可溶性髓系觸發(fā)受體-1(sTREM-1)elisa定量檢測(cè)試劑盒
ADPG焦磷酸化酶(AGP)測(cè)試盒微量法α-黑色su(αMSH)試劑盒 Anti-POLR2A Antibody神經(jīng)顆粒蛋白5
肌營(yíng)養(yǎng)不良蛋白(DMD)試劑盒 Anti-POLR2A Antibody突觸結(jié)合蛋白11
C4結(jié)合蛋白α(C4BPα)試劑盒 Anti-POMT2 Antibody溶質(zhì)載體家族蛋白21成員1C1
核孔蛋白205kda(NUP205)試劑盒Anti-POMC Antibody電壓門控鈉通道SCN3B蛋白
殺性/通透性增加蛋白(BPI)試劑盒 Anti-PON1 Antibody胞吐蛋白Sec6
胃粘液su(GM)試劑盒 Anti-PON1 Antibody神經(jīng)突觸su13
環(huán)指蛋白4(RNF4)試劑盒Anti-PON1 Antibody多配體聚糖結(jié)合蛋白2
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