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當(dāng)前位置:上海邦景實(shí)業(yè)有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>脂肪酸代謝系列>> 肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶(CPT1)測(cè)試盒微量法
貨號(hào) | BJ-01611201-1 |
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商品介紹:
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定 測(cè)定意義: 肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶是存在于線粒體內(nèi)膜的一類?;D(zhuǎn)移酶??赡娴卮呋瘡孽;鵩u酶A將酰基轉(zhuǎn)移至L-肉毒堿的反應(yīng),在轉(zhuǎn)運(yùn)脂肪酸通過線粒體內(nèi)膜的過程中起重要作用。 測(cè)定原理: 基于肉堿和脂酰fu酶A在丙二酰fu酶A存在與否的條件下,通過肉堿脂酰轉(zhuǎn)移酶(CPT-I)的作用,產(chǎn)生脂酰肉堿,并釋放出巰基fu酶A(COA-SH),與Ellman試劑DN-TB反應(yīng)后,產(chǎn)生黃色的TNB。通過其吸收峰值得變化(412nm),來定量分析CPT-1的活性。 需自備的儀器和用品: 可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、無水乙醇和蒸餾水 |
特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱 | 檢測(cè)方法 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶(CPT1)測(cè)試盒微量法 | 微量法 | 100管/96樣 | BJ-01611201-1 |
測(cè)定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測(cè)定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測(cè)定(在96孔板中依次加入下列試劑)充分混勻,室溫靜置30min后,450nm處測(cè)定各管吸光值A(chǔ)。
注意事項(xiàng):
待測(cè)樣品-70℃可保存1個(gè)月。需注意反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致SOD部分失活。
一個(gè)試劑盒如果不能在3次內(nèi)使用完畢,其中的WST-8需要在使用時(shí)適當(dāng)分裝,以避免反復(fù)凍融導(dǎo)致的檢測(cè)效果下降。
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋時(shí)所用的稀釋液應(yīng)盡量與樣品一致。樣品用試劑盒提供的SOD樣品制備液制備時(shí),標(biāo)準(zhǔn)品也宜使用SOD樣品制備液進(jìn)行稀釋;當(dāng)樣品為血液等無需處理的樣品時(shí),宜使用試劑盒提供的SOD檢測(cè)緩沖液稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。
抗氧化物會(huì)對(duì)本試劑盒的檢測(cè)產(chǎn)生干擾,例如0.1mM ascorbic acid,5mM GSH都會(huì)使測(cè)定出來的吸光度顯著升高。此時(shí)盡管樣品沒有顏色,如果設(shè)置了使用說明中的空白對(duì)照3,就可以消除樣品中的抗氧化物的干擾。
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽。
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
優(yōu)點(diǎn)如下:
1、快速簡(jiǎn)便:全程約50分鐘,可測(cè)100例左右樣本。
2、取樣量微:本法取手指或耳垂等末梢血20ul~50ul即可測(cè)紅細(xì)胞中的SOD,只需2ml靜脈血可測(cè)白細(xì)胞中的SOD及血小板中SOD,只需50mg左右組織就可測(cè)組織勻漿、胞漿中的SOD,0.2g組織可測(cè)線粒體及微粒體中的SOD。
3、靈敏度高:IC50=0.05g/ml,是鄰苯三酚法的18倍。
4、穩(wěn)定性好:試劑盒2~8℃存放6個(gè)月有效。
5、再現(xiàn)性好:變異系數(shù)CV=1.7%。
6、回收試驗(yàn): X =103.3%。
7、受外界影響因素小:干擾因素少,重復(fù)性強(qiáng)。
8、測(cè)試面廣:可測(cè)動(dòng)物血液、組織、各種體液、灌流液等、各種培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)菌、植物組織、各種水產(chǎn)以及化妝品、保健品等,效果均佳。
小鼠肌鈣蛋白T假單胞菌屬人8-羥基鳥糖苷酶1(OGG1)elisa定量檢測(cè)試劑盒
大鼠吡啶酚豌豆根瘤菌人絲an酸/蘇an酸激酶39(STK39)elisa定量檢測(cè)試劑盒
麥胚凝集su/凝集蛋白毛頭鬼傘,腿菇人糖化血清蛋白(GSP)elisa定量檢測(cè)試劑盒
人生長(zhǎng)激su釋放因子釀酒酵母人生長(zhǎng)調(diào)節(jié)致癌基因β(GROβ)elisa定量檢測(cè)試劑盒
大鼠β位樣前體蛋白裂解酶2緊密假諾卡氏菌人生長(zhǎng)激su結(jié)合蛋白(GHR/P)elisa定量檢測(cè)試劑盒
小鼠c-fos梭菌人精an酸酶(ARG2)elisa定量檢測(cè)試劑盒
荊豆凝集su托姆青霉人食欲suB/阿立新B(OXB)elisa定量檢測(cè)試劑盒
兔血栓suB2泛酸枝芽胞桿菌人髓過氧化物酶抗體(Anti-MPO)elisa定量檢測(cè)試劑盒
人巨噬趨化因子腫塊芽孢桿菌屬人多藥耐藥相關(guān)蛋白1(MRP1)elisa定量檢測(cè)試劑盒
小鼠c-jun栗疫菌人脫氧吡啶酚(DPD)elisa定量檢測(cè)試劑盒
人α/β干擾su受體金針菇人唾液酸結(jié)合免疫球蛋白樣凝集su3(SIGLEC3)elisa定量檢測(cè)試劑盒
大鼠骨性磷酸酶嗜中溫寒冷桿菌人粘附蛋白相互作用蛋白(CYTIP)elisa定量檢測(cè)試劑盒
槐凝集su釀酒酵母人纖調(diào)蛋白(FMOD)elisa定量檢測(cè)試劑盒
兔血管內(nèi)皮粘附分子1銀白離褶傘人纖溶酶原激活劑(PLGA)elisa定量檢測(cè)試劑盒
花生凝集su果生鏈核盤菌人血幼su(HJV/HFE2)elisa定量檢測(cè)試劑盒
肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶(CPT1)測(cè)試盒微量法血小板因子3(PF3)試劑盒Anti-PI3 AntibodyCD2F-10
基質(zhì)衍生因子2(SDF-2)試劑盒Anti-PI3K-gamma/PIK3CG AntibodySmad蛋白E3泛su連接酶2
蕈型乙酰受體亞型M2(M-AChRM2)試劑盒Anti-PIAS1 Antibody磷酸化神經(jīng)生長(zhǎng)相關(guān)蛋白SCG10
維生suD受體(VDR)試劑盒Anti-PIAS1 Antibody染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白5
白介su2受體α(IL-2Rα/CD25)試劑盒Anti-PIAS2 Antibody染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白6
脫氫表雄酮硫酸酯(DHEA-S)試劑盒 Anti-PIAS3 Antibody染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白2
受體TNFRSF結(jié)合絲an酸蘇an酸激酶2(RIPK2)試劑盒Anti-PIAS4 Antibody粘結(jié)蛋白SA2
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