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腸桿菌保存

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所  在  地上海市

更新時(shí)間:2020-11-26 15:34:10瀏覽次數(shù):167次

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腸桿菌保存低溫保存法,將生長穩(wěn)定期的細(xì)胞懸浮在10%甘油或其他低冰點(diǎn)液體中,密封于安瓿管內(nèi),然后控制冷卻速度,使安瓿管溫度逐步下降至 -35℃時(shí),即可置于-150~-196℃的液氮罐中保存。大多數(shù)微生物如病毒、噬菌體、多種細(xì)菌、放線菌、酵母和原蟲、特別是一些用冷凍干燥法有困難的微生物,都可用此法長期保存。

基本概念:
(1)菌群:由多種細(xì)菌混合組成的相對穩(wěn)定的細(xì)菌群體,產(chǎn)品僅用于科研具有某些共同性狀。如大腸菌群包括大腸桿菌、產(chǎn)氣腸細(xì)菌及他們之間的過渡類型。
(2) 菌屬:菌種的上一級分類,通常性狀相近、親緣關(guān)系密切的若干菌種組成一個(gè)菌屬,如芽孢桿菌屬、葡萄球菌屬、乳桿菌屬等。
(3)是細(xì)菌基本的分類單位,通常指表型特征相似、親緣關(guān)系接近的一類細(xì)菌群體,與同屬內(nèi)其他種有著明顯差異;當(dāng)涉及到細(xì)菌保存時(shí),菌種是指細(xì)菌的種子(用來長期保存)資源。
(4) 菌型:同一菌種的不同細(xì)菌,在某些方面存在較小差異的為同一菌型,通常一個(gè)菌種內(nèi)的細(xì)菌可以分為多種不同的菌型。
(5) 菌株:由一個(gè)獨(dú)立分離的單細(xì)胞系培養(yǎng)而成的純遺傳型群體及其一切后代,一種微生物的每一個(gè)不同來源的純培養(yǎng)物均可稱為該菌種的一個(gè)菌株。

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規(guī)格參數(shù):
資源名稱  腸桿菌保存
種屬: Enterobacter│sp.

分離基物: 土樣

提供形式: 凍干物

安全等級: 1

模式菌株: no

培養(yǎng)基: 206

生長條件: 50℃

存儲條件: -80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法;其他
儀器設(shè)備與器具:
1 恒溫培養(yǎng)箱:36±1℃。
2 1000ml三角燒瓶、1ml、10ml移液管。
3 接種針。
4 顯微鏡。
5 超凈工作臺。
6 玻片、酒精燈、洗耳球、試管架。
7 天平:感量0.01g。
8 滅菌釜。
9 培養(yǎng)皿(直徑為90mm)、試管,經(jīng)121℃、30分鐘滅菌。
10試管夾、酒精燈、秒表、載玻片
培養(yǎng)方法:
培養(yǎng)基 乳酸菌培養(yǎng)基 Ⅱ:Lacto-casein peptone (乳酪蛋白胨) 10g Beef extract 10g Yeast extract (酵母膏) 5g Glucose (葡萄糖) 5g Tween (吐溫) 80 1g K2HPO4 2g Na-acetate (醋酸鈉) 5g Diamine citrate (檸檬酸二胺) 2g MgSO4.7H2O 0.2g MnSO4.H2O 0.05g Distilled water (蒸餾水) 1000m pH 6.5-6.8。121℃,15min。
傳代方法 ①凍干管:75%酒精擦拭管壁,后用砂輪在凍干管壁劃兩圈,掰斷,用200μL無菌水或培養(yǎng)基充分溶解,平板涂布,活化培養(yǎng)。 ②斜面:試管口用75%酒精擦拭后,火焰灼燒,后用無菌接種鏟切塊,挑取接入平板或斜面,培養(yǎng)。
生長條件 30℃,好氧
存儲條件 2-8℃冷藏
低溫存法:
①簡單保存法,將瓊脂斜面孢子培養(yǎng)物、菌絲懸浮液以及由麩皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培養(yǎng)物置于4℃冰箱保存,保存時(shí)間不超過1~2個(gè)月,若將谷物原料制備的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蠟,以隔絕外界空氣和水汽,保持時(shí)間可達(dá)3~4個(gè)月;②液氮超低溫保存法,將生長穩(wěn)定期的細(xì)胞懸浮在10%甘油或其他低冰點(diǎn)液體中,密封于安瓿管內(nèi),然后控制冷卻速度,使安瓿管溫度逐步下降至 -35℃時(shí),即可置于-150~-196℃的液氮罐中保存。大多數(shù)微生物如病毒、噬菌體、多種細(xì)菌、放線菌、酵母和原蟲、特別是一些用冷凍干燥法有困難的微生物,都可用此法長期保存。
微生物培養(yǎng)方法:
1、平板劃線分離法:把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細(xì)胞用接種環(huán)圈在平板培養(yǎng)基表面,通過分區(qū)劃線稀釋而得到較多獨(dú)立分布的單個(gè)細(xì)胞,經(jīng)培養(yǎng)后生長繁殖成單菌落。
2、稀釋涂布平板法將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋,然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進(jìn)行培養(yǎng),在稀釋度足夠高的菌液里,聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞,產(chǎn)品僅用于科研從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落。
上述兩種方法雖然都可以實(shí)現(xiàn)觀察菌落特征的目的,但平板劃線分離法不能對菌落計(jì)數(shù),而稀釋涂布平板法培養(yǎng)過程復(fù)雜,對平板的要求比較高,可參照以下步驟:
a、制備平板培養(yǎng)基將蔗糖瓊脂培養(yǎng)基加熱溶化并冷卻至65℃,向蔗糖瓊脂培養(yǎng)基中加入克林霉素溶液3~5ml并混合均勻,然后取20ml混合均勻的培養(yǎng)基溶液倒入培養(yǎng)皿,輕輕搖動培養(yǎng)皿,使培養(yǎng)基溶液均勻分布在培養(yǎng)皿底部,待培養(yǎng)基溶液凝固后即得平板培養(yǎng)基。
b、制備活性污泥混合液稱取活性污泥土樣15g,放入盛100ml無菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶中,振搖15~20min混合均勻,用一支1ml無菌吸管從中吸取1ml土壤懸液加入盛有9ml無菌水的大試管中充分混勻,制成活性污泥混合液。
c、培養(yǎng)基涂布從活性污泥混合液中吸取0.2ml,滴在平板培養(yǎng)基表面的中央位置,用無菌玻璃涂棒將活性污泥混合液沿同心圓方向輕輕地向外擴(kuò)展,使之分布均勻。
Bovine Enterovirus(BEV)牛腸道病毒RT-LAMP試劑盒英文名稱:Hoechst 33342/PI Double Stain Kit

產(chǎn)品規(guī)格:100T

發(fā)貨周期:1~3天

Hoechst 33342/PI 雙染試劑盒(Hoechst 33342/PI Double Stain Kit)采用Hoechst 33342和化丙啶(PI)雙染的方法以區(qū)分凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞的試劑盒。其檢測原理是:細(xì)胞核熒光染料Hoechst 33342可以穿透細(xì)胞膜,嵌入雙鏈DNA后釋放藍(lán)色熒光。對于正常細(xì)胞,其可少許進(jìn)入細(xì)胞膜使其染上低藍(lán)色。而凋亡細(xì)胞由于細(xì)胞膜通透性增強(qiáng),從而使得進(jìn)入凋亡細(xì)胞內(nèi)的Hoechst 33342明顯多于正常細(xì)胞,熒光強(qiáng)度比正常細(xì)胞要高。另外,細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)染色質(zhì)會固縮,從而使得染料能更有效和聚集的結(jié)合于DNA,并且凋亡細(xì)胞膜上的p-糖蛋白泵功能受損而不能有效的將Hoechst 33342排除到細(xì)胞外使其在細(xì)胞內(nèi)的積累增加,這些特征都使得凋亡細(xì)胞經(jīng)染色后熒光會比正常細(xì)胞明顯增強(qiáng)。但細(xì)胞核熒光染料PI不能穿透細(xì)胞膜完整的正常細(xì)胞或凋亡細(xì)胞,即活細(xì)胞對PI染料拒染而對于壞死細(xì)胞,其細(xì)胞膜的完整性在早期即已喪失,可被PI染色。

經(jīng)上述兩種染料雙染后,使用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡檢測時(shí),正常細(xì)胞為弱紅色熒光+弱藍(lán)色熒光,凋亡細(xì)胞為弱紅色熒光+強(qiáng)藍(lán)色熒光,壞死細(xì)胞為強(qiáng)紅色熒光+弱藍(lán)色熒光。

本試劑盒染色快速方便,可用一步法或者兩步法進(jìn)行染色。使用流式細(xì)胞儀檢測時(shí),無需稀釋等配制過程,也無需再準(zhǔn)備其它任何溶液。本試劑盒足夠檢測100個(gè)樣品,每個(gè)樣品的細(xì)胞數(shù)量可達(dá)105-106個(gè)。

注意事項(xiàng)

1) Hoechst 33342、PI對人體有害,請注意適當(dāng)防護(hù);

2) Hoechst 33342、PI需避光,整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程盡量避光操作;

3) 熒光染料均存在淬滅情況,建議染色后需盡快檢測;

4) Hoechst 33342 與細(xì)胞孵育時(shí)間不宜過長,一般控制在20min以內(nèi)。太長容易引起該染料的發(fā)射光譜由藍(lán)光向紅光遷移,導(dǎo)致紅色熒光和藍(lán)色熒光比例改變。

5) 如果用于組織樣品檢測,則必須把組織消化制備成單細(xì)胞懸浮液后才可以進(jìn)行檢測。

6) 為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

儲存條件:-20℃,有效期12個(gè)月

丙酮中準(zhǔn)物質(zhì) 1mL Alcelephine Herpesvirus 1(AlHV-1狷羚皰疹病毒1型探針法熒光定量PCR試劑盒

丙酮中氯靈溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 1mL Aleutian Disease Virus(ADV)阿留申病病毒PCR試劑盒

丙酮中殺蟲畏溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 1mL Aleutian Disease Virus(ADV)阿留申病病毒染料法熒光定量PCR試劑盒

丙酮中蚜滅多溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 1mL Aleutian Disease Virus(ADV)阿留申病病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

丙酮中克螨特溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 1mL Allpaahuayo virus(ALLV)奧爾帕瓦約病毒RT-PCR試劑盒

丙酮中硫線磷溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 1mL Allpaahuayo virus(ALLV)奧爾帕瓦約病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

丙酮中硫磷溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 1mL Allpaahuayo virus(ALLV)奧爾帕瓦約病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

丙酮中伐滅磷溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 1mL Alternaria spp.交鏈孢霉屬通用PCR試劑盒

液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 1mL Alternaria spp.交鏈孢霉屬通用染料法熒光定量PCR試劑盒

液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 1mL Alternaria spp.交鏈孢霉屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒

丙酮中吡菌磷溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 1mL Amapari virus(AMAV)阿馬帕里病毒RT-PCR試劑盒

丙酮中二溴磷溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 1mL Amapari virus(AMAV)阿馬帕里病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 1mL Amapari virus(AMAV)阿馬帕里病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

丙酮中滅菌磷溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 1mL Amidostomum anseri鵝裂口線蟲PCR試劑盒

丙酮中毒壤磷溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 1mL Amidostomum anseri鵝裂口線蟲染料法熒光定量PCR試劑盒
腸桿菌保存人c-jun ELISA試劑盒英文名稱:Human c-jun ELISA Kit進(jìn)口/原裝

人抗眼肌抗體(EMAb)ELISA試劑盒英文名稱:Human eye muscle antibody,EMAb ELISA Kit*

人抗胰蛋白酶(AT)ELISA試劑盒英文名稱:Human Anti-trypsin,AT ELISA Kit進(jìn)口/分裝

人抗胰島素受體抗體(AIRA)ELISA試劑盒 英文名稱:Human anti-insulin receptor antibody,AIRA ELISA Kit進(jìn)口/分裝

人抗乙型肝炎病毒e抗體(HBeAb)ELISA試劑盒 英文名稱:Human anti-hepatitis B virus e antibody,HBeAb ELISA Kit*

人抗乙型肝炎病毒表面抗體(HBsAb)ELISA試劑盒 英文名稱:Human anti-hepatitis B virus surface antibody,HBsAb ELISA Kit*

人抗乙型肝炎病毒核心IgM抗體(HBcAb-IgM)ELISA試劑盒 英文名稱:Human anti-hepatitis B virus core IgM,HBc-IgM antibody ELISA Kit進(jìn)口/原裝

 

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